表皮細胞のアポトーシスにおけるp53遺伝子およびp53蛋白の発現

p53基因及p53蛋白在表皮细胞凋亡中的表达

• 批准号: 06770661
• 负责人: 小西 啓介
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770661/
• 关键词: 表皮細胞; アポトーシス; p53遺伝子; p53蛋白

本年度、本研究代表者は、培養ヒト表皮細胞より、アポトーシスに密接に関与する酵素であるトランスグルタミナーゼのcDNAを、アポトーシスを媒介する膜表面蛋白であるFas抗原cDNAを、それぞれクローニングし、Biochem.Biophys.Res.Commun.に報告した。さらに表皮細胞のアポトーシスにおけるp53遺伝子、p53蛋白の発現について解析するために、培養ヒト表皮細胞に、ヒト細胞のDNA損傷を誘起することが知られている、各種波長の紫外線をさまざまの照射量で照射し、照射後経時的にそれぞれの表皮細胞より核酸蛋白同時抽出試薬ISOGEN-LSを用いてDNA、RNA、蛋白を抽出した。さらに今回抽出したDNAをアガロースゲルを用いて電気泳動しアポトーシスの指標であるDNA radder patternを今後検出する予定である。またRNAはホルムアルデヒドアガロースゲル電気泳動に供したのち、アイソトープで標識したp53 cDNAをプローブとしてハイブリダイゼーションを行い、バイオイメージングアナライザーBAS2000を用いてp53 mRNAの発現量を解析したい。今後、同様の方法で、アポトーシスを誘発する抗原で、我々が表皮細胞よりクローニングしたトランスグルタミナーゼcDNAおよびFas抗原cDNAをプローブとして用い、それぞれのmRNAの発現量を検討する。また今回抽出した蛋白を用いてSDS-ポリアクリルアミド電気泳動後、ウエスタンブロットを行い、抗p53抗体とペルオキシダーゼ結合二次抗体を用いてp53蛋白の発現量を今後ひきつづき検討する予定である。

This year, the representative of this study reported on Fas antigen cDNA of membrane surface protein mediated by enzyme, enzyme and receptor in cultured epidermal cells, Biochem.Biophys.Res.Commun. p53 gene and p53 protein expression in epidermal cells were analyzed, cultured epidermal cells were induced DNA damage in epidermal cells, and DNA, RNA and protein were extracted simultaneously from epidermal cells after irradiation with ultraviolet rays of various wavelengths. The DNA radder pattern is determined by the current DNA migration. To analyze the expression of p53 mRNA in BAS2000 and to identify p53 mRNA in BAS2000. In the future, the same method will be used to investigate the expression of antigen and Fas antigen cDNA in epidermal cells. After electroporation, the protein is extracted from the protein, and the anti-p53 antibody is used to bind to the secondary antibody. The amount of p53 protein is determined in the future.