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基底細胞癌関連遺伝子のポジショナルクローニング

基底细胞癌相关基因的定位克隆

基本信息

批准号：
05770631
负责人：
小西啓介
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Kyoto Prefectural University of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度、本研究代表者は、まず基底細胞癌(BCC)の発生・進展に関与する癌抑制遺伝子が、第9番染色体長腕上の9q31近傍に存在することをさらに明確にするために、BCC症例を積極的に収集し遺伝子解析を行うためのサンプル数を増加させた。これらのサンプルにより9q31領域のマーカーであるD9S29およびD9S28を用い、この領域におけるヘテロ接合性の消失(LOH)を詳しく検討した。その結果LOH解析にinformativeな症例の40%にこの領域のLOHが認められ、コーカサス人と同様日本人でもBCCの発生・進展に関与する癌抑制遺伝子が9q31近傍に存在する可能性が確認された(Cancer Letters, in press).現在、ヒトCGM1細胞からアガロースビーズ法を用いてDNAを抽出しEcoRIで部分消化後、パルスフィールド電気泳動を行い、このゲル中のDNAに対し9q31領域のマーカーであるD9S29をプローブとしてin gel hybridizationを施工し、9q31領域のDNAをゲル中に検出し溶出を試みている。今後このDNA断片を用いてYACライブラリーを作成し、このライブラリーの中から、もう一度D9S29をプローブとして、目的とする遺伝子を含むクローンを選びそのDNAを鋳型として合成オリゴヌクレオチドを用いてシークエンスする予定である。さらに、このようにして得られた配列の下流領域中から新たなプローブとなる配列を選択し、ライブラリーの中からその下流の配列を有するクローンをスクリーニングする予定である。さらにこのgene walkingを繰り返して、目的とする遺伝子を含む領域の物理的地図を作成するとともに、それぞれのプローブを用いて実際のBCC症例についてLOH解析を行い、もっとも高頻度に欠失が見られる領域を同定し、目的の癌抑制遺伝子をポジショナルクローニングする予定である。

This year, the researchers reported an increase in the number of cancer suppressor genes associated with the development and progression of basal cell carcinoma (BCC) and the presence of a specific gene on chromosome 9 near q31. D9 S29 and D9 S28 are used in this field. LOH (Loss of Cohesion) is discussed in detail. The results of the LOH analysis were informative and 40% of the cases in this field were identified as LOH. The likelihood of the presence of cancer suppressor genes near 9 q31 was confirmed (Cancer Letters, in press). Now, CGM 1 cells are used to extract DNA, partially digest it, and then conduct electromigration. DNA in CGM 1 cells is used to construct DNA in CGM 1 cells. DNA in CGM 1 cells is used to isolate DNA in CGM 1 cells. DNA in CGM 1 cells is used to isolate DNA in CGM 1 cells. In the future, this DNA fragment will be used to create, synthesize, select and use D9 S29 fragments. In addition, in the downstream field of the arrangement, the new arrangement is selected, and in the downstream field, the arrangement is predetermined. The gene walking pattern is composed of two parts: one part is the gene walking pattern, the other part is the gene walking pattern, the other part is the gene walking pattern.