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アンチセンス法による難治性肝疾患治療法の開発:肝類洞壁細胞ターゲティングと機能モジュレーション

反义方法治疗顽固性肝病的进展：靶向肝窦细胞和功能调节

基本信息

批准号：
07557045
负责人：
川野淳
金额：
$ 10.5万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至 1997
项目状态：
已结题

项目摘要

類洞内皮細胞の障害・機能変化は肝炎、肝不全や移植免疫等様々な肝病態形成に深く関与しており、アンチセンスや3重鎖DNAなどのアンチジーン法や遺伝子導入法による類洞内皮細胞機能制御は難治性肝疾患治療への道を開くものと期待される。平成8年度はヒアルロン酸(HA)とポリリジン(PLL)からなる類洞内皮細胞認識能を有する櫛形遺伝子キャリアPLL-g-HAを創製し、そのDNAとの複合体形成能、類洞内皮細胞への送達能について基礎的な検討を行った。最終年度である平成9年度はJohn J.Lemasters教授(University of North Carolina、Department of Cell Biology & Anatomy)との共同研究として共焦点レーザー顕微鏡を用いたPLL-g-HAキャリア/DNA複合体の初代培養類洞内皮細胞への取り込み動態の定量的解析を行った。その結果、キャリア/DNA複合体はDNA単独添加時に比し極めて効率的かつ速やかに類洞内皮細胞の細胞質内へ取り込まれ、核にも移行することが証明された。本方法を用いて遺伝子導入効率を評価することにより、さらに高効率の次世代キャリアシステムの開発に着手した。またPLL-g-HAキャリアシステムによるin vivoでの遺伝子発現を検討した。^<32>P標識プラスミドとPLL-g-HAよりなる複合体をラット尾静脈から静注すると、投与1時間後にはPLL-g-HA/プラスミドDNA複合体は類洞内皮細胞に選択的に送達され、少なくとも72時間後まで類洞内皮細胞に限局したリポーター遺伝子発現を認めることができた。以上の成果は英文論文として投稿中であり、また米国へ特許出願を行った。

The damage and functional change of cavity-like endothelial cells are closely related to the formation of liver diseases such as hepatitis, liver insufficiency and transplantation immunity. The treatment of refractory liver diseases is expected to open up a new way for the functional control of cavity-like endothelial cells. In 2008, we conducted fundamental research on the production of HA, PLL, PLL-g-HA, DNA complex formation, and delivery of PLL-g-HA. The final year was 2009. Professor John J. Lemasters (University of North Carolina, Department of Cell Biology & Anatomy) conducted joint research on PLL-g-HA microscopies for quantitative analysis of the dynamics of primary cultured cavity-like endothelial cells. The results showed that the DNA/DNA complex was more efficient than the DNA alone when it was added, and the cytoplasmic and nuclear migration of cavity-like endothelial cells was demonstrated. The method starts with the development of the next generation of high efficiency systems by evaluating the efficiency of gene introduction. PLL-g-HA gene discovery in vivo <32>The PLL-g-HA complex was injected intravenously into the caudal vein 1 hour later, and the PLL-g-HA/PLL-HA complex was transferred to the cavity-like endothelial cells 72 hours later. The above achievements are published in English papers.