動物細胞におけるアゴニスト依存性cAMP排出の重要性とその機構の解明

阐明动物细胞中激动剂依赖性 cAMP 外流的重要性和机制

基本信息

批准号：
07780620
负责人：
高木淳一
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

申請者はこれまで血小板や種々の培養動物細胞を用いて情報伝達経路に関わる蛋白質や脂質についての研究を行ってきた。この過程でアラキドン酸の代謝産物であるある脂質が培養繊維芽細胞においてアデニレートシクラーゼを強く抑制することを発見し、その作用機序を検討して行くうち、細胞が作ったcAMPがほとんど細胞外に出されていることに気付いた。そこでcAMPが粘菌以外の生物においても細胞外で何らかのシグナル伝達分子として機能しているのではないかという仮説をたて、「高等生物におけるcAMPの細胞外メッセンジャーとしての役割の解明」と言う課題で平成5年度の奨励研究(萌芽的研究)の交付を受けた。本研究ではこの課題のもとで前年度得られた成果をもとにして、さらに具体的にcAMPが細胞の外に積極的に排出され、異種の細胞に影響を与える過程について明らかにすることをこころみた。cAMPを介した異種細胞同士のコミュニケーションのモデルとして、間質組織における線維芽細胞とそこに浸潤してきた白血球との組み合わせに仮定し、実験を行った。まず培養線維芽細胞においてアゴニスト刺激によるcAMPの産生と排出がどのようにカップルしているかを、細胞内外のcAMP量をラジオイムノアッセイで測定して調べた。その結果線維芽細胞ではプロスタグランジンなどのアゴニストで産生したcAMPは大部分が細胞外に排出されることがわかった。これに対し、白血球系の癌細胞であるHL-60ではアゴニスト刺激によって産生したcAMPは半分以上細胞内にとどまるという意外な結果が得られた。白血球は刺激を受けるとロイコトリエンなどの生理活性脂質を作るが、このような物質が周りの線維芽細胞のcAMP排出に与える影響を見たところ、12-hydroxyeicosatetraenoic acid(12-HETE)が線維芽細胞からのアゴニスト依存性cAMP排出のみを特異的に抑制することがわかった。白血球が産生する生理活性脂質が細胞特異的なcAMP排出の抑制をすることは細胞間質での細胞間のクロストークにこれらの物質が関わっていること可能性を示唆している。

申请人先前已经对使用血小板和各种培养的动物细胞参与信息传输途径的蛋白质和脂质进行了研究。在此过程中，我发现某种脂质（一种蛛网膜酸代谢产物）强烈抑制培养的成纤维细胞中的腺苷酸环化酶，并且在研究其作用机理时，我意识到细胞生产的大多数cAMP在细胞外释放。因此，我们假设cAMP在粘液模具以外的生物体中的细胞外发挥了某种信号分子的作用，并获得了1993年的鼓励研究（出现研究），任务是“阐明camp作为较高生物体中细胞外凡人的作用”。这项研究旨在根据去年在这一挑战下获得的结果，阐明cAMP在细胞外积极排泄并影响异源细胞的过程。我们进行了一个实验，假设基质组织中成纤维细胞和白细胞中的成纤维细胞组合，这些成纤维细胞已将其渗透为通过CAMP之间异源细胞之间通信的模型。首先，我们调查了如何通过使用放射免疫测定器结合的培养的成纤维细胞中cAMP的产生和排泄。结果，发现在成纤维细胞中，由前列腺素等激动剂产生的cAMP在细胞外面被排出。相反，令人惊讶的结果是，在HL-60中，由激动剂刺激产生的白细胞系统的癌细胞，超过一半的细胞留在细胞内。当发生刺激时，白细胞会产生生理活性的脂质，例如白细胞，并且当我们检查了这种物质对周围成纤维细胞的cAMP排泄的影响时，我们发现12-羟基二氧乙酸苯二甲酸（12-羟基苯甲酸（12-氢化）（12-Heete）特别抑制了Agonistents Camp excribs agonistents excritions依赖性依赖性依赖性依赖性依赖性依赖性。白细胞产生的生物活性脂质的细胞特异性cAMP排泄的抑制表明，这些物质可能与细胞基质中的细胞间串扰有关。