血小板活性化におけるβ1インテグリン（GPIIa）のシグナリング分子としての挙動

β1 整合素 (GPIIa) 作为血小板激活信号分子的行为

• 批准号: 09770818
• 负责人: 高木 淳一
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770818/
• 关键词: インテグリン; モノクローナル抗体; 血小板; エピトープ; シグナル伝達; コンフォーメーション変化

インテグリンは種々のα/β鎖の組み合わせからなる多種類の接着レセプターであり、単に細胞外の接着蛋白質に細胞をつなぎ止めるdocking mo1eculeというよりは、リガンドとの結合によって細胞内にシグナルを伝え、また逆に細胞内からのシグナルによってそのリガンド結合活性が制御されるという、2方向性のシグナリング分子である事がわかってきた。血小板の活性化においてはこれまでβ3インテグリン(GPIIIa)がこの2方向性のシグナリング分子として重要な役割を果たしていることが知られているが、β1インテグリン(GPHa)のシグナリングについての研究はあまりなされていない。そこで本研究では申請者が最近作製した抗体(AG89)を利用して、血小板がβ1インテグリンを介して活性化された時とβ3インテグリンを介して活性化されたときのシグナリング経路の違いを調べ、現実の血栓形成初期に血小板に「何が、どういう順番で」起こっているのかを明らかにすることを目指した。本研究は申請者が作製したAG89というモノクローナル抗体を使った実験が主体となった。この抗体はヒトβ1インテグリンの活性化したコンフォーメーションを選択的に認識し、リガンドを結合したインテグリンにはさらに良く結合する。これらの性質を利用して以下のように研究を進めた。(1)まずAG89のβ1インテグリン認識の詳細を理解するため、AG89のエピトープがβ1インテグリンの分子中のどこに有るのかを調べた。ヒト/マウスキメラのβ1インテグリンを細胞に発現させてそれに対するAG89の反応性を調べ、AG89のエピトープがアミノ酸残基で426-586番目に相当する部分のいわゆる"stalkregion"にあることを突き止めた。(2)AG89にはβ1インテグリンを活性化してリガンドとの結合を増大させる活性があった。この活性は他の活性化抗体であるTS2/16などと比べて弱いものであったが、両者の活性化メカニズムは完全に異なることがわかった。

イ ン テ グ リ ン は kind 々 の alpha/beta lock の group み close わ せ か ら な る variety の then レ セ プ タ ー で あ り, 単 に extracellular の then protein に cells を つ な ぎ check め る docking Mo1ecule と い う よ り は, リ ガ ン ド と の combining に よ っ て in cells に シ グ ナ ル を 伝 え, ま た inverse に intracellular か ら の シ グ ナ ル に よ っ て そ の リ ガ ン ド binding activity が suppression さ れ る と い う, 2 directional の シ グ ナ リ ン グ molecular で あ る matter が わ か っ て き た. の platelet activation に お い て は こ れ ま で beta 3 イ ン テ グ リ ン (GPIIIa) が こ の 2 directional の シ グ ナ リ ン グ molecular と し て important な "を cut fruit た し て い る こ と が know ら れ て い る が, beta 1 イ ン テ グ リ ン (GPHa) の シ グ ナ リ ン グ に つ い て の research は あ ま り な さ れ て い な い. そ こ で this study で は applicants が recently cropping し た antibodies (AG89) を using し て, platelet が beta 1 イ ン テ グ リ ン を interface し て activeness さ れ た と when beta 3 イ ン テ グ リ ン を interface し て activeness さ れ た と き の シ グ ナ リ ン グ 経 road の violations い を べ, now be の thrombosis early に platelet に "が, ど う い う shun's で" こ Youdaoplaceholder0 って る る る を を ら にする にする とを とを とを the eye points to た た. This study は applicants が cropping し た AG89 と い う モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody を っ た be 験 が subject と な っ た. こ の antibody は ヒ ト beta 1 イ ン テ グ リ ン の activeness し た コ ン フ ォ ー メ ー シ ョ ン を sentaku に know し, リ ガ ン ド を combining し た イ ン テ グ リ ン に は さ ら に good く combining す る. The properties of て れら れら を are used to study を into めた by using <s:1> て. (1) ま ず AG89 の beta 1 イ ン テ グ リ ン の を detailed understanding す る た め, AG89 の エ ピ ト ー プ が beta 1 イ ン テ グ リ ン の molecule の ど こ に have る の か を adjustable べ た. ヒ ト / マ ウ ス キ メ ラ の beta 1 イ ン テ グ リ ン を cells に 発 now さ せ て そ れ に す seaborne る AG89 の を べ, anti 応 sex AG89 の エ ピ ト ー プ が ア ミ ノ acid residues で's 426-586 mesh に quite す る part の い わ ゆ る "stalkregion に あ る こ と を tu き check め た. (2)AG89に <e:1> β1 <s:1> テグリ テグリ を を activation <s:1> てリガ ドと ドと <s:1> binding を increases させる activity があった. こ の active は he の activeness antibody で あ る TS2/16 な ど と than べ て weak い も の で あ っ た が, struck の activeness メ カ ニ ズ ム は に completely different な る こ と が わ か っ た.

项目成果

T.Isobe: "Propolypeptide of von Willebrand factor is a novel ligand for VLA-4 integrin." The Journal of Biological Chemistry. 272. 8447-8453 (1997)

T.Isobe：“血管性血友病因子的前多肽是 VLA-4 整合素的新型配体。”

J.Takagi: "Structural interlock between ligand binding site and stalk like region of β1 integrin revealed by a monoclonal antibody recognizing conformation-dependent epitope." The Journal of Biochemistry. 121. 914-921 (1997)

J. Takagi：“识别构象依赖性表位的单克隆抗体揭示了配体结合位点和 β1 整合素茎状区域之间的结构互锁。”《生物化学杂志》121. 914-921 (1997)。

H.Inuyama: "Factor X-dependent thrombin generating activities on a neuroblastoma cell and their disappearance upon differentiation" The Journal of Cellular Physiology. 173. 406-414 (1997)

H.Inuyama：“神经母细胞瘤细胞上 X 因子依赖性凝血酶生成活性及其在分化时的消失”《细胞生理学杂志》。

J.Takagi: "Changing ligand specificities of αvβ1 and avβ3 integrins by swapping a short diverse sequence of the β subunit." The Journal of Biological Chemistry. 272. 19794-19800 (1997)

J. Takagi：“通过交换 β 亚基的短多样性序列来改变 αvβ1 和 avβ3 整合素的配体特异性。”《生物化学杂志》272。19794-19800 (1997)

J.Tsuchida: "Classification of "activation" antibodies against integrin β1 chain." FEBS Letters. 416. 212-216 (1997)

J.Tsuchida：“针对整合素 β1 链的‘激活’抗体的分类。” FEBS Letters。416. 212-216 (1997)