血管系における一酸化窒素(NO)産生とNO合成酵素の活性調節機構に関する研究

血管系统一氧化氮（NO）生成及NO合酶活性调控机制研究

• 批准号: 07770102
• 负责人: 藤井 順逸
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770102/
• 关键词: 一酸化窒素; 一酸化窒素合成酵素; バキュロウイルス; 血管平滑筋

本研究ではは血管系でのNOの産生とその合成酵素NOSの活性調節機構を明らかにするために次の二点についての検討を行った。(一)血管内皮細胞型NOSIIIの活性調節機構の解析。トランスファーベクターのpVL1392にヒトNOS IIIcDNAを挿入し、バキュロウイルスDNAと共に昆虫細胞のSf21に感染させ、リコンビナントウイルスを得た。この組み換えウイルスを大量増殖させ、これを昆虫細胞に感染させることによってヒトNOS IIIを大量産生させた。この細胞をTriton-X100で可溶化後、2′,5′-ADP SepharoseおよびDEAE-CelluloseカラムによってリコンビナントNOSIIIを精製したところ、活性にヘムが必須であることがわかった。(二)血管平滑筋におけるNOS IIの発現調節機構の解析。分離培養したラット大動脈の血管平滑筋細胞に、IL-1β存在下でプリンおよびアデノシン受容体に対するアゴニスト(ATP、ADP、アデノシンなど)を投与したところ、培養液中の亜硝酸(NOの酸化物)量が増加した。この増加はアデノシン受容体のアンタゴニストによって抑えられたので、アデノシン受容体の関与が示唆された。ノーザンブロット法によりNOの産生がNOS IIの発現に由来することを明らかにした。

在这项研究中，我们研究了以下两点，以阐明血管系统中无生产的机理及其对NOS合酶的活性调节。 （1）分析NOSIII血管内皮细胞型活性调节机理。将人NOS III cDNA插入转移载体PVL1392，并与昆虫细胞的SF21一起与杆状病毒DNA感染以获得重组病毒。重组病毒大量生长，并感染的昆虫细胞产生大量的人类III。用Triton-X100溶解细胞后，使用2'，5'-ADP Sepharose和Deae-Cellulose柱纯化重组NOSIII，发现血红素对于活动至关重要。 （2）分析血管平滑肌中NOS II的表达调节机理。当在IL-1β存在的情况下，将嘌呤和腺苷受体的激动剂（ATP，ADP，腺苷等）用于分离和培养的大鼠主动脉时，培养基中的亚硝酸盐量（NO）的量增加了。腺苷受体的拮抗剂抑制了这种增加，这表明腺苷受体的参与。 Northern印迹表明，NOS II的表达没有产生。

项目成果

M.Asahi: "Inactivation of Glutathione Peroxidase by Nitric Oxide:Implication for Cyototoxicity" J.Biol.Chem.270. 21035-21039 (1995)

M.Asahi：“一氧化氮灭活谷胱甘肽过氧化物酶：对细胞毒性的影响”J.Biol.Chem.270。

Y.Ikeda: "Human γ-Glutamyl Transpeptidase Mutants Involving Conserved Aspartate Residues and the Unique Cysteine Residues of the Light Subunit." J.Biol.Chem.270. 12471-12475 (1995)

Y.Ikeda：“涉及保守天冬氨酸残基和轻亚基独特半胱氨酸残基的人γ-谷氨酰转肽酶突变体。”J.Biol.Chem.270（1995）。

T.K.Smith: "Different Sites Acivicin Binding and Inactivation of γ-Glutamyl Transpeptidase." Proc.Natl.Acad.Sci.USA.92. 2360-2364 (1995)

T.K.Smith：“γ-谷氨酰转肽酶的不同位点阿西维辛结合和失活。”Proc.Natl.Acad.Sci.USA.92 (1995)。

Y.Ikeda: "Involvement of Ser-451 and Ser-452 in the Catalysis of Human γ-Glutamyl Transpeptidase." J.Biol.Chem.270. 22223-22228 (1995)

Y.Ikeda：“Ser-451 和 Ser-452 参与人 γ-谷氨酰转肽酶的催化。”J.Biol.Chem.270 (1995)。