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血管系における一酸化窒素(NO)産生とNO合成酵素の活性調節機構に関する研究

血管系统一氧化氮（NO）生成及NO合酶活性调控机制研究

基本信息

批准号：
07770102
负责人：
藤井順逸
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770102/
关键词：
一酸化窒素一酸化窒素合成酵素バキュロウイルス血管平滑筋

项目摘要

本研究ではは血管系でのNOの産生とその合成酵素NOSの活性調節機構を明らかにするために次の二点についての検討を行った。(一)血管内皮細胞型NOSIIIの活性調節機構の解析。トランスファーベクターのpVL1392にヒトNOS IIIcDNAを挿入し、バキュロウイルスDNAと共に昆虫細胞のSf21に感染させ、リコンビナントウイルスを得た。この組み換えウイルスを大量増殖させ、これを昆虫細胞に感染させることによってヒトNOS IIIを大量産生させた。この細胞をTriton-X100で可溶化後、2′,5′-ADP SepharoseおよびDEAE-CelluloseカラムによってリコンビナントNOSIIIを精製したところ、活性にヘムが必須であることがわかった。(二)血管平滑筋におけるNOS IIの発現調節機構の解析。分離培養したラット大動脈の血管平滑筋細胞に、IL-1β存在下でプリンおよびアデノシン受容体に対するアゴニスト(ATP、ADP、アデノシンなど)を投与したところ、培養液中の亜硝酸(NOの酸化物)量が増加した。この増加はアデノシン受容体のアンタゴニストによって抑えられたので、アデノシン受容体の関与が示唆された。ノーザンブロット法によりNOの産生がNOS IIの発現に由来することを明らかにした。

In this study, we investigated the mechanism of NO production and NOS activity regulation in vascular system. (1) Analysis of the regulatory mechanism of NOSIII activity in vascular endothelial cells. The pVL1392 gene encoding NOS III cDNA was inserted into the genome, and the DNA was isolated from Sf21 of insect cells. This group of insects has been greatly increased, and since this insect cell was infected, a large number of NOS III has been produced. After solubilization, 2′,5′-ADP Sepharose and DEAE-Cellulose were used to purify NOSIII, and the activity of NOSIII was necessary. (2) Analysis of the regulation mechanism of NOS II in vascular smooth muscle. When angiotensin (ATP, ADP, and adenosine) were administered to vascular smooth muscle cells isolated and cultured in the local aorta in the presence of IL-1β and adenosine receptors, the amount of nitric acid (an acidified product of NO) in the culture medium increased. This increase in the number of users of the receiver and the number of users. The origin of NOS II is unknown.