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ヒトヘルペスウイルス(HHV-7)の糖蛋白質の解析

人疱疹病毒（HHV-7）糖蛋白分析

基本信息

批准号：
07770218
负责人：
向井徹
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770218/
关键词：
ヒトヘルペスウイルス7 糖蛋白質糖蛋白B 糖蛋白H 糖蛋白L

项目摘要

(目的)本研究は、ヘルペスウイルスにおいて細胞への侵入に重要な役割を果たし、宿主の中和抗体の標的となる糖蛋白B(gB),糖蛋白H(gH),糖蛋白L(gL)のヒトヘルペスウイルス7(HHV-7)相同糖蛋白の遺伝子解析、発現蛋白による抗原性の解析、単クローン抗体の作製を目的とした。(方法)1,HHV-7 gB,gH,gL相同遺伝子の解析;HHV-7ゲノムを65%カバーするライブラリーを作製、それよりgB,gH,gL各遺伝子をもつクローンを同定し、各糖蛋白の塩基配列を決定した。2,各糖蛋白の発現、解析;gB,gHは、免疫原性が強いと予想される領域を、gLは全ORF領域をGST融合蛋白として大腸菌に発現させた。これをマウスに免疫し各抗血清を調整し、HHV-7感染細胞を用いた免疫沈降反応(IP)を行った。大腸菌発現蛋白に対しヒト血清によるウエスタンブロット法(WB)を行った。3,糖蛋白に対する単クローナル抗体の作製;免疫原は粗精製ヴィリオンを用い、全gB遺伝子を一過性発現させた動物細胞を用いた蛍光抗体法によりスクリーニングし、抗gB単クローン抗体の作製を行っている。(結果、考察)gB遺伝子の塩基配列はヘルペスウイルス科の中で特に保存されている1つである。今回のHHV-7gB遺伝子解析よりβヘルペス亜科のHHV-6に近縁であることを証明し、他の2つの糖蛋白の配列解析もこの結果を支持していた。GST融合蛋白を用いたIPよりgHとgLはheterodimerをつくり感染細胞に存在した。gBは自身がcleaveされprocessingを受けること、糖付加をされることを証明した。WBでは血清と反応する発現蛋白はなく、用いた発現部位はヒトに抗原性が弱いか無い事が示唆された。単クローナル抗体の作製は現在2つの抗gB特異単クローンが採れさらに作製中である。

(Purpose) In this study, it is important to analyze the invasion of cells and target neutralizing antibodies of the host, such as glycoprotein B (gB) and glycoprotein H (gH). Glycoprotein L (gL) Glycoprotein Glycoprotein Glycoprotein Glycoprotein No. Analysis of subtypes, analysis of the antigenicity of the present protein, and the purpose of manufacturing the monoclonal antibody. (Method)1,HHV-7 gB, gH, gL have the same genetic analysis; , それよりgB, gH, and gL are all determined by the same それよりをもつクローンを, and the base arrangement of each glycoprotein is decided by した. 2. The detection and analysis of each glycoprotein; gB, gH, strong immunogenicity and strong immunogenicity, gL, full ORF domain, and GST fusion protein of coliform bacteria. Each antiserum was adjusted using the HHV-7-infected immune system and the HHV-7-infected cells were reacted by immunoprecipitation (IP). Escherichia coli protein test method (WB) using serum test method. 3. Preparation of glycoprotein antibodies; use of crude and refined immunogens; full gB residues; transient disease We are now producing animal cells using the photoantibody method of によりスクリーニングし and anti-gB じクローン antibodies. (Results, investigation) gB 伝子の塩组组はヘルペスウイルス科の中で特に preserved されている1つである. Analysis of the HHV-7gB legacy this timeあることをprove し, and his 2つのglycoprotein arrangement analysis もこのresult をsupport していた. The GST fusion protein was used to infect the cells using the IP of the gH and gL heterodimer. gB's own cleavage, processing and processing, and sugar pay plus cleavage and processing, prove it. WB's serum and anti-antigenicity proteins are present, and the antigenicity of the present site is weak and non-existent.単クローナルAntibodies are produced and now 2つのanti-gB specific 単クローンがpicks are produced by である.