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Fas以外の新しいアポトーシス誘導抗原のクローニング

Fas 以外的新细胞凋亡诱导抗原的克隆

基本信息

批准号：
07770872
负责人：
畑裕之
金额：
$ 0.51万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

Fasを介さないアポトーシスを誘導する,骨髄腫細胞表面抗原のクローニングを試みた.骨髄腫細胞株KHM11を免疫原として用い,型のごとくマウスハイブリドーマを作成した.二回のcell fusionで103個のcloneを得た.96well plateに抗マウス-IgG抗体をcoat後,ハイブリドーマ上清中のモノクローナル抗体をクロスリンクさせ,最後にKHM11を添加し,その増殖をtritium thymidineの取り込みで測定した.その結果,すべてのcloneは,KHM11の増殖を最大10%程度増加させ,目的とするアポトーシス誘導抗体は得られなかった.フローサイトメトリーによる解析でもcell shirinkingを誘導するクローンが2個得られたものの,アポトーシスの誘導は確認できなかった.これらは当初の目的とは異なった結果であったが,ハイブリドーマfeeder用のマウス腹腔マクロファージ上清のみでもKHM11の増殖刺激が得られたことから,マクロファージ由来の何らかのサイトカインがKHM11の増殖刺激因子として作用していることが示唆された.事実IFN gammaはKHM11の増殖を刺激することが確認された.一方,骨髄腫細胞にはFasを介さない自然の培養条件でも起こるアポトーシスがあることが確認され,その程度は細胞株,症例間で異なっていることが確認された.今回は,アポトーシスを誘導する新しい表面抗原は得られなかったが,今後,このようなアポトーシスが惹起されるメカニズムを解明したい(平成8年度奨励A申請中).

Fas is a medium for expression of antigens on osteoma cell surface. The bone marrow cell line KHM11 was used as an immunogen. The cell fusion of the second loop contains 103 clones. After the 96well plate is coated with anti-IgG antibody, the supernatant is mixed with anti-IgG antibody. Finally, KHM11 is added, and the growth of tritium thymidine is determined. As a result, the clone of KHM11 increased by 10% at most, and the antibody was induced. The analysis of cell shirking results in two different types of cell shirking, and the identification of cell shirking results. KHM 11 's reproductive stimulation was obtained from the original purpose and effect of KHM 11. IFN gamma is the most important factor affecting the proliferation of KHM11. In one aspect, osteoma cells were cultured under natural conditions, and the degree of cell strain was different from case to case. In the future, the new surface antigen will be introduced into the system.