Fas以外の新しいアポトーシス誘導抗原のクローニング

Fas 以外的新细胞凋亡诱导抗原的克隆

基本信息

批准号：
07770872
负责人：
畑裕之
金额：
$ 0.51万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

Fasを介さないアポトーシスを誘導する,骨髄腫細胞表面抗原のクローニングを試みた.骨髄腫細胞株KHM11を免疫原として用い,型のごとくマウスハイブリドーマを作成した.二回のcell fusionで103個のcloneを得た.96well plateに抗マウス-IgG抗体をcoat後,ハイブリドーマ上清中のモノクローナル抗体をクロスリンクさせ,最後にKHM11を添加し,その増殖をtritium thymidineの取り込みで測定した.その結果,すべてのcloneは,KHM11の増殖を最大10%程度増加させ,目的とするアポトーシス誘導抗体は得られなかった.フローサイトメトリーによる解析でもcell shirinkingを誘導するクローンが2個得られたものの,アポトーシスの誘導は確認できなかった.これらは当初の目的とは異なった結果であったが,ハイブリドーマfeeder用のマウス腹腔マクロファージ上清のみでもKHM11の増殖刺激が得られたことから,マクロファージ由来の何らかのサイトカインがKHM11の増殖刺激因子として作用していることが示唆された.事実IFN gammaはKHM11の増殖を刺激することが確認された.一方,骨髄腫細胞にはFasを介さない自然の培養条件でも起こるアポトーシスがあることが確認され,その程度は細胞株,症例間で異なっていることが確認された.今回は,アポトーシスを誘導する新しい表面抗原は得られなかったが,今後,このようなアポトーシスが惹起されるメカニズムを解明したい(平成8年度奨励A申請中).

我们试图克隆骨髓瘤细胞表面抗原以诱导没有FA的凋亡。使用骨髓瘤细胞系KHM11作为免疫原，将小鼠杂交瘤作为一种类型制备。获得了两个细胞融合。将抗小鼠-IGG抗体涂在96个井板上，并将杂交瘤上清液中的单克隆抗体交联，并通过胸苷二胺掺入来测量生长。结果，所有克隆都将KHM11的生长提高了约10％，并且未获得靶凋亡诱导抗体。通过流式细胞仪分析也导致细胞。尽管获得了两个克隆以诱导悬浮液，但尚未确认凋亡的诱导。这些结果与最初的目的不同，但是用小鼠腹膜巨噬细胞上清液用于杂交瘤喂养器的KHM11的生长刺激，这表明来自巨噬细胞的一些细胞因子是KHM11的生长刺激因子。实际上，已确认IFNγ刺激KHM11的生长。另一方面，已经证实，骨髓瘤细胞的凋亡甚至在不介导FA的自然培养条件下发生，并且在细胞系和病例之间观察到这种差异的程度。在本文中，没有获得新的表面抗原诱导凋亡，但我们想阐明将来发生这种凋亡的机制（目前正在应用1996年的建议A）。