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乳酸菌の細胞接着に関わる受容体タンパク質の解明に関する研究

乳酸菌细胞粘附相关受体蛋白的阐明研究

基本信息

批准号：
08660107
负责人：
山本憲二
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08660107/
关键词：
乳酸菌細胞接着糖脂質膜糖鎖受容体タンパク質 Lactobacillus casei G_<A1>

项目摘要

我々は腸内細菌のなかでもヒトの腸管内で腸内フローラを形成し、整腸作用などの有用な働きをすることが知られているLactobacillus属乳酸菌が、病原性細菌と同じように、細胞膜上に存在する糖脂質の糖鎖に結合することを見出している。そこで、本研究では糖脂質の糖鎖を認識するLactobacillus属乳酸菌の受容タンパク質について解析した。Lactobacillus属乳酸菌がG_<A1>を初めとする中性糖脂質の糖鎖に結合することは、Lactobacillus casei菌体をウサギに免疫して得られた血清より精製した抗L.casei IgG抗体を用いたTLC免疫染色法によって確認した。このような中性糖脂質に対する受容体は乳酸菌の細胞表層にあると考え、それを検索するためにL.casei菌体をグアニジン処理して表層タンパク質画分を得た。この画分に中性糖脂質G_<A1>を添加した後、電気泳動を行って抗G_<A1>モノクローナル抗体を用いたウエスタンブロッティングを行ったところ、G_<A1>に結合するタンパク質を見出した。本タンパク質はおよそ16kDaの分子サイズを持つサブユニットからなる約160kDaのタンパク質であった。さらにこのタンパク質のN末端アミノ酸配列を調べたところ27残基までの配列を決定することができた。本受容タンパク質の遺伝子のクローニングを目的として、L.caseiのDNAをSau3AIで消化し、10-15kbpの断片をCharomidベクターにつないだ後、in-vitroパッケージし、これを大腸菌DH5αに導入して、ゲノムライブラリーを作成した。N末端由来のオリゴヌクレオチドをプローブとしてスクリーニングを行ったところ、いくつかのポジティブクローンを得ることができた。さらに2つのクローンについて遺伝子の制限酵素地図を作成した。

We found that Lactobacillus belongs to lactic acid bacteria, pathogenic bacteria, and glycopolipid binding on cell membranes. In this study, we analyzed the mechanism of glycolipid binding in Lactobacillus. Lactobacillus is a genus of lactic acid bacteria<A1>. It has been identified by TLC immunostaining. The receptor of neutral sugar and lipid can be separated from the surface layer of lactic acid bacteria. After the addition of neutral carbohydrate lipid G_, <A1>the electrophoresis was carried out. The anti-G<A1>_, anti-G<A1>_ This is a 16kDa molecule with a molecular weight of about 160kDa. The N-terminal amino acid sequence of this protein is determined by the amino acid sequence of the 27 residues. The DNA of L.casei was digested by Sau3AI, and the fragment of 10-15kbp was introduced into Escherichia coli DH5 α. N terminal from the source to the end of the list, the end of the list. 2. The restriction enzyme of the gene is produced.