プロバイオティックスを用いる乳酸菌セラピーの基礎研究

利用益生菌进行乳酸菌治疗的基础研究

• 批准号: 14656038
• 负责人: 山本 憲二
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14656038/
• 关键词: プロバイオティックス; 乳酸菌セラピー; ラクトバチルス層乳酸菌; T7RNAポリメラーゼ; ラクトースプロモーター; β-グルクロニダーゼ遺伝子; ラクトフェリン; ラクトバチルス属乳酸菌; シャトルベクター

本研究はプロバイオティックスとしての乳酸菌の機能をより一層高めるために宿主腸管との高い接着能や有用物質の分泌能を乳酸菌に賦与させようと言う企てで行ったものである。目的の乳酸菌を得ることができれば、腸管に接着する病原性細菌の排除などが可能であり、乳酸菌によるセラピーを具現化することが可能になる。本年度は異種タンパク質を乳酸菌で発現させるための異種タンパク質発現系の構築を試みた。先ず、T7RNAポリメラーゼ遺伝子をラクトースプロモーターの制御下に置いたプラスミド(pKM143)を構築するとともに、レポーター遺伝子として大腸菌β-グルクロニダーゼ遺伝子をT7プロモーターの制御下においたプラスミド(pKM143)を構築し、両プラスミドをLactobacillus casei102Sにエレクトロポレーション法にて導入した。この組換え菌をラクトースを添加した培地で培養するとβ-グルクロニダーゼ活性が誘導され、異種タンパク質を誘導発現する系が構築できた。しかし、この系においてはグルコース培養時(非誘導条件下)において発現の抑制が見られた。これはβ-グルクロニダーゼ遺伝子を挿入したプラスミド上のCm^Rの転写が完全には終結せずに、300塩基下流から始まるβ-グルクロニダーゼ遺伝子の転写も続いて進行するために活性が高くなると考えた。そこで、Cm^Rとoriをお互いに逆の位置に挿入したところ、非誘導条件下における活性が抑制された。この系を用いることによってラクトース誘導下でβ-グルクロニダーゼ活性が30倍以上高発現され、異種タンパク質の発現誘導を行なう系として有効であることが明らかになった。

This study は プ ロ バ イ オ テ ィ ッ ク ス と し て の function of lactic acid bacteria の を よ り reachs め る た め に host insufflate と の high い then can や の useful material can secrete を に fu and lactic acid bacteria さ せ よ う と said う enterprise て で line っ た も の で あ る. Target の lactobacillus を る こ と が で き れ ば, insufflate に then す る の eliminate pathogenic bacteria な ど が may で あ り, lactic acid bacteria に よ る セ ラ ピ ー を with modern す る こ と が may に な る. This year は heterogeneous タ ン パ ク qualitative を lactobacillus で 発 now さ せ る た め の heterogeneous タ ン パ ク qualitative 発 try now is の build を み た. First ず, T7RNA ポ リ メ ラ ー ゼ heritage 伝 son を ラ ク ト ー ス プ ロ モ ー タ ー の under the system of imperial に buy い た プ ラ ス ミ ド (pKM143) を build す る と と も に, レ ポ ー タ ー heritage 伝 son と し て coliform beta グ ル ク ロ ニ ダ ー ゼ heritage 伝 son を T7 has プ ロ モ ー タ ー の under the system of imperial に お い た プ ラ ス ミ ド pKM143 を construct し, struck プ ラ ス ミ ド を Lactobacillus casei102S に エ レ ク ト ロ ポ レ ー シ ョ ン method に て import し た. こ の group in え bacteria を ラ ク ト ー ス を add し た petty で cultivate す る と beta グ ル ク ロ ニ ダ ー ゼ active が induced さ れ, heterogeneous タ ン パ ク qualitative を induced 発 now す る department が build で き た. し か し, こ の is に お い て は グ ル コ ー ス incubation (non) under the condition of inducing に お い て 発 の inhibit が now see ら れ た. こ れ は beta グ ル ク ロ ニ ダ ー ゼ posthumous son 伝 を scions into し た プ ラ ス ミ ド の on Cm ^ R の planning write が completely に は end せ ず に, 300 salt dirty か ら beginning ま る beta グ ル ク ロ ニ ダ ー ゼ posthumous son 伝 の planning write も 続 い て in す る た め に high active が く な る と exam え た. そ こ で, Cm ^ R と ori を お mutual い に inverse position の に scions into し た と こ ろ, under the condition of the induction に お け る inhibition さ が れ た. こ の is を with い る こ と に よ っ て ラ ク ト ー ス induced by で beta グ ル ク ロ ニ ダ ー ゼ 30 times more than the high active が 発 now さ れ, heterogeneous タ ン パ ク qualitative の 発 line now induced を な う department と し て have sharper で あ る こ と が Ming ら か に な っ た.