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乳酸菌の細胞接着に関わる菌体表層タンパク質とそのデザイン

参与乳酸菌细胞粘附的细胞表面蛋白及其设计

基本信息

批准号：
10145228
负责人：
山本憲二
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は腸内細菌のなかでも代表的な有用菌であるLactobacillus属乳酸菌がウイルスや病原性細菌と同じように宿主の細胞表顔に存在する糖鎖を介して腸管に接着し、フローラ(菌叢)を形成するものと考えて研究を行って来た。その結果、Lactobacillus属乳酸菌が糖脂質の糖鎖に特異的に結合することを見出すとともに乳酸菌の菌体表層に“糖鎖受容体タンパク質"が存在することを見出し、その遺伝子のクローニングを行った。本研究では“糖鎖受容体タンパク質"の遺伝子解析と大腸菌で発現したタンパク質を解析するとともに、本遺伝子を乳酸菌ヘセルフクローニングして菌体表層に本タンパク質を多量に発現するようにデザインした組換え乳酸菌の取得を試みた。Lactobacillus属乳酸菌(Lactobacillus casei)の糖鎖受容体タンパグ質の遺伝子を含む組換えプラスミドpR3Eを有する大腸菌DH5αより得られた菌体の無細胞搗出液についてnative gradientゲル電気泳動を行ったところ、L.acaseiの受容休タンパク質とほぼ同じ分子サイズの位置に強くタンパク質が発現していることを見出した。L.caseiの受容体タンパク質はスフィンゴ糖脂質のGA1(Galβl-3GalNAcβ1-4Galβl-4Glcβ1-1'Ceramide)の糖鎖に強く接着するので、組換え大腸菌の無細胞抽出液にGA1を添加して、native gradientゲル電気泳動を行った後、抗GA1モノクローナル抗体を用いたImmunoblottingを行ったところ、発現タンパク質に相当する位置に微弱ながら染色が認められた。また、菌体表層画分についてSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動を行った結果、L.caseiの受容体.タンパク質と同じ分子サイズの位置にタンパク質のバンドが見られ、N-末端アミノ酸配列を調べたところ、L.caseiの受容体タンパク質のN-末端アミノ酸配列と同じであった。そこで、組換えプラスミドpR3EをシャトルベクターpBE31およびpH4611に繋いだ後、エレクトロポレーション法によって、Lactobacillus属乳酸菌への組込みを行い、セルフクローニングを試みている。

The useful bacteria represented by the bacteria, Lactobacillus, lactic acid bacteria, pathogenic bacteria, host, cell table, sugar, sugar, tube, bacteria, lactic acid bacteria, The results showed that Lactobacillus belongs to lactic acid bacteria, glycolipids, glycolipids, lactobacillus, glycolipids, glycolipids, In this study, Glycosaminoglycans were used to detect Lactobacillus. In this study, Lactobacillus and Lactobacillus were detected. The results showed that Lactobacillus was tested in the system of Lactobacillus. Lactobacillus is a kind of lactic acid bacteria (Lactobacillus casei), which is a kind of lactic acid bacteria (Lactobacillus casei). There is no cell output of DH5 α, Lactobacillus, Lactobacillus, Lactic acid bacteria, Lactobacillus, Lactic acid bacteria, Lactobacillus, Lacto L.casei-3GalNAc β 1-4Gal β l-4Glc β 1-1'Ceramide (Gal β l-Gal β 1-4Gal β l-4Glc β 1-1'Ceramide) Gal β 1-Gal β 1-Gal β β 1-glycolipid (Gal β 1-1'Ceramide) Gal β 1-Gal β 1-Gal β β 1-4Gal β l-4Glc β 1-Gal β β 1-4Gal β l-4Glc β 1-Gal β β 1-Gal β β We can see that the position is quite low. The staining is very weak. The results of the swimming test and the L.casei capacitance of the bacteria table and SDS- cell table. The position of the molecule is similar to that of the molecule, the position of the molecule is similar to that of the molecule, the position, the After the treatment of pR3E, Lactobacillus, pBE31, pH4611, Lactobacillus, etc.