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乳酸菌の細胞接着に関わる菌体表層タンパク質のデザイン

参与乳酸菌细胞粘附的细菌表面蛋白的设计

基本信息

批准号：
12019238
负责人：
山本憲二
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、乳酸菌Lactobacillus caseiの細胞接着に関わる糖鎖受容体タンパク質について、菌体内における所在を調べるとともに、本タンパク質の遺伝子を乳酸菌へセルフクローニングし、菌体表層に本タンパク質を多量に発現するようにデザインした組換え乳酸菌を取得することを試みた。本タンパク質の遺伝子は本菌が持つプラスミドにも存在していることを見出した。菌体より抽出したプラスミドより得られた2.7kbHindIII断片に存在するORFがコードするタンパク質の一次構造は、既に見出しているゲノム断片の3.0kb EcoRI断片上のORFにコードされている本タンパク質の一次構造と100%の相同性を示した。両者は塩基配列が3塩基のみ異なるだけであった。プラスミドをキュアリングした株について、菌体表層タンパク質画分をSDS-PAGEで調べたところ、本タンパク質が発現していることより、本タンパク質の遺伝子はゲノムにコードされていると推測された。次に、本タンパク質の菌体内における所在を本タンパク質の抗体を用いて免疫電顕により調べた結果、主に菌体表層に存在することを確認した。そこで、糖鎖受容体タンパク質を発現していないLactobacillus属乳酸菌に本タンパク質の遺伝子を組み込み、本タンパク質を菌体表層に発現させて糖脂質への接着能を獲得したLactobacillus属乳酸菌の取得を試みた。即ち、本タンパク質の遺伝子を含むDNA断片をシャトルベクターpBE31に組み込み、得られたプラスミドpNK5をエレクトロポレーション法によって、本タンパク質を発現していないL.rhamnosusJCM2771に導入した。その結果、得られたL.rhamnosuspNK5/2771において、本タンパク質が発現していることをウエスタンブロッティング解析によって確認した。

In this study, Lactobacillus casei cells are involved in the regulation of the sugar lock receptor, the location of the bacteria, the production of the substance of the Lactobacillus casei cells, the production of the substance of the Lactobacillus casei cells, and the acquisition of lactic acid bacteria. The essence of the organism is to maintain the existence of the organism. The ORF on the 3.0kb EcoRI fragment of the 2.7kb HindIII fragment is 100% identical to the ORF on the 3.0kb HindIII fragment. The two sides of the border are divided into three groups. In addition, it is estimated that the surface layer of the bacteria is separated from the quality of the bacteria by SDS-PAGE, and the quality of the bacteria is detected by SDS-PAGE. The results of immunoregulation and the presence of antibodies to the host cell surface were confirmed. In this paper, we try to obtain the sugar lipid content of Lactobacillus by the method of producing sugar lipid content in the surface layer of Lactobacillus. That is to say, the gene of the original protein contains DNA fragments, which are introduced into the JCM2771. The results of the study were as follows: L.rhamnosuspNK5/2771, the original quality of the study was found in the middle of the study, and the analysis was confirmed.