权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

微生物の酵素を活用したタンパク質への糖鎖の付加に関する研究

利用微生物酶向蛋白质添加糖链的研究

基本信息

批准号：
06660102
负责人：
山本憲二
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は土壌より単離同定した糸状菌Mucor hiemalis が培養液中に、糖タンパク質のアスパラギン結合糖鎖の高マンノース型、混成型糖鎖のみならず複合型糖鎖をも切断遊離するEndo-β-N-acetylglucosaminidase(Endo-M)を見出すとともに、本酵素が糖ペプチドの糖鎖を受容体に転移する糖(鎖)転移活性を持つことを見出した。本研究では本酵素の糖転移活性を利用することによって糖鎖をタンパク質やペプチドに付加することを試みた。1.糖鎖の転移活性:本酵素は糖タンパク質のアスパラギン結合糖鎖のジアセチルキトビオース結合に作用して糖鎖を切断遊離する加水分解活性を有している一方、糖鎖を受容体に転移する糖転移活性をも有することを見出した。即ち、糖鎖の受容体としてN-アセチルグルコサミン(GlcNAc)を用い複合型糖鎖を有するヒト血清アシアロトランスフェリンの糖ペプチドを供与体として、本酵素による糖鎖の転移を調べたところ、GlcNAcに糖鎖が付加した糖(鎖)転移生成物を確認した。2.糖鎖の転移受容体:糖鎖の転移受容体について調べたところ、GlcNAcのみならず、ジアセチルキトビオースやトリアセチルキトトリオース、また、グルコースやマンノースなどにもアシアロトランスフェリンの複合型糖鎖が転移することをHPLC分析などによって確認した。さらに、ダンシル化したAsn-GlcNAcも転移受容体となった。3.糖(鎖)転移活性測定法の開発:本酵素の糖鎖転移活性を、ピリジルアミノ化したジアセチルキトビオースを受容体として用いることにより、HPLCで迅速に分析することができる方法を開発した。4.ウシ膵臓リボヌクレアーゼの糖鎖のすげ替え:高マンノース型糖鎖を持つウシ膵臓リボヌクレアーゼをペプシンで消化して得られた糖ペプチドにEndo-HタイプのEndo-β-N-acetylglucosaminidaseを作用した後、アシアロトランスフェリン糖ペプチドを糖鎖供与体として、Endo-Mを作用したところ、複合型糖鎖を持つリボヌクレアーゼの糖ペプチドが得られることを確認した。

The enzyme is isolated from the culture medium of Mucor hiemalis, and the enzyme is characterized by its ability to dissociate the complex glycosaminidase (Endo-M) from the complex glycosaminidase in the culture medium, and its ability to shift the glycosaminidase from the glycosaminidase to the glycosaminidase receptor. This study aims to utilize the sugar transfer activity of this enzyme to increase the sugar lock in the substrate and substrate. 1. Carbohydrate transfer activity: This enzyme has the ability to bind to the carbohydrate, to dissociate the carbohydrate, and to transfer the carbohydrate to the receptor. That is to say, the sugar lock receptor and the N-type sugar lock receptor (GlcNAc) have been used to identify the sugar lock shift product of the enzyme. 2. Carbohydrate shift receptor: Carbohydrate shift receptor in the middle of the adjustment, GlcNAc concentration, separation, separation, The first part of the article is about the transfer of the receptor. 3. Development of a method for determining carbohydrate shift activity: A rapid assay for carbohydrate shift activity of the enzyme was developed by HPLC. 4. It is confirmed that Endo-β-N-acetylglucosaminase of Endo-H and Endo-β-N-acetylglucosaminase of Endo-H and Endo-β-N-acetylglucosaminase of Endo-H and Endo-β-N-acetylglucosaminase of Endo-M and Endo-β-N-acetylglucosaminase of Endo-H and Endo-β-N-acetylglucosaminase of Endo-H and Endo-β-N-acetylglucosaminase of Endo-M and Endo-β-N-acetylglucosaminase of Endo-H and Endo-β-N-acetylglucosaminase of Endo-M.