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12-リポキシゲナーゼの病態生理機能に関する基礎的研究

12-脂氧合酶病理生理功能的基础研究

基本信息

批准号：
08670165
负责人：
吉本谷博
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

アラキドン酸の12位に酸素を添加する12-リポキシゲナーゼは,血管平滑筋の遊走,腫瘍細胞の転移,神経情報伝達,アルドステロン分泌などに関与していることが示されている。これまでヒト血小板およびラット松果体の12-リポキシゲナーゼのcDNAをクローニングし,そのアミノ酸配列から12-リポキシゲナーゼには『血小板型』および『白血球型』の2種類のアイソフォームが存在することを明らかにした。今回この酵素の病態生理機能を明らかにする目的で,酵素のcDNAの発現と精製,抗体の作製とそれを用いた酵素の組織分布に関する基礎的研究を行った。ラットの12-リポキシゲナーゼcDNAを制限酵素で切断し,tacプロモーターを持つ6個のヒスチジン配列の下流に組み込んで発現ベクターを構築した。この発現ベクターで大腸菌を形質転換し,IPTGの添加によって酵素の発現を誘導した。この大腸菌で発現された12-リポキシゲナーゼのアミノ末端には6個のヒスチジンが付加されているので,ニッケルなどの金属イオンをキレートする性質をもっている。この性質を利用して,ニッケル-テトラ酢酸(NTA)アガロースを用いたアフィニティークロマトグラフィーで,12-リポキシゲナーゼ蛋白を均一に精製することができた。精製した酵素蛋白を抗原としてウサギを免疫してポリクローン抗体を調整した。この抗体を用いた免疫組織化学によって,肺胞マクロファージ,膵臓ランゲルハンス島細胞,副腎皮質,一部の神経節細胞に酵素が存在していることが明らかになった。

The addition of 12-amino acids to the 12-position of the amino acid sequence, vascular smooth muscle migration, tumor cell migration, signal transmission, and secretion of the amino acid sequence are all related to the expression of the amino acid sequence. The 12-fragment cDNA sequence of the platelet and pineal gland was mapped to the 12-fragment cDNA sequence of the 12-fragment cDNA sequence. In order to clarify the pathological physiological function of the enzyme, the enzyme cDNA production and purification, the antibody production and the enzyme tissue distribution were carried out. The 12-bit cDNA restriction enzyme is cut off, and the 6-bit cDNA restriction enzyme is constructed. The development of E. coli was characterized by the addition of IPTG, which induced the development of enzymes. This large intestine bacteria is found in the 12-mer group and the 6-mer group at the end of the group. This property is used to refine the properties of NTA. Refined enzyme antigens and antibodies Immunohistochemical staining of the antibody showed that there was an enzyme in lung cells, kidney cells, pararenal cortex, and some ganglion cells.