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アラキドン酸12-リポキシゲナーゼの活性部位の分子構造に関する研究

花生四烯酸12-脂氧合酶活性位点的分子结构研究

基本信息

批准号：
06670142
负责人：
吉本谷博
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670142/
关键词：
アラキドン酸リポキシゲナーゼ cDNA ヒスチジン非ヘム鉄

项目摘要

アラキドン酸12-リポキシゲナーゼは,アラキドン酸の12番目の炭素に分子状酵素を導入して,12-ヒドロペルオキシ酸を生成する酵素である。この酵素には「血小板型」と「白血球型」の2つのアイソフォームがあり,脂肪酸との反応性,免疫原性,一次構造や遺伝子構造から区別することができる。私達はすでにヒト血小板およびブタ白血球の酵素のcDNAをクローニングし,その一次構造を決定したが,本研究では部位特異的変異法によって酵素の活性中心を分子レベルで解析した。動物や植物のリポキシゲナーゼには非ヘム鉄が含まれており,すべてのリポキシゲナーゼのアミノ酸配列を比較すると,8個のヒスチジン残基が保存されている。そこで,ブタ白血球の12-リポキシゲナーゼのcDNAをtacプロモーターを持つpKK223-3に組み込み,部位特異的変異法によって8個のヒスチジンをそれぞれロイシンに置換して,変異酵素の触媒機能と鉄の含有量を調べた。361,366および541番目のヒスチジンを置換した酵素では,酵素活性がほとんど検出されず,鉄の含有量も著明に低下していた。128と356番目のヒスチジンの変異では酵素活性も鉄含有量も低下しなかった。426番目のヒスチジンの変異では,活性が野生型の5%に低下した鉄含有量には大きな変化がなかった。384と393番目のヒスチジンの変異酵素では酵素蛋白の回収率が非常に低く,また393番目のヒスチジンの変異酵素ではSDS電気泳動で分解産物と思われるバンドが認められ,これらの変異酵素の鉄分析は行わなかった。以上の実験結果より,ブタ白血球の12-リポキシゲナーゼでは361,366および541番目ヒスチジン残基が非ヘム鉄の結合に関与しており,酵素の触媒機能に重要であることが示された。

12-amino acid 12-amino acid The enzyme is divided into two types: platelet type and leukocyte type, fatty acid type, antigenicity, immunogenicity, primary structure and substructure. In this study, site-specific analysis of the cDNA sequence of the enzyme activity center was performed. 8 of the 8 residues in the amino acid sequence were preserved. In this case, the 12-part cDNA sequence of white blood cells is selected from pKK223-3, and the site-specific variation method is used to modify the 8-part cDNA sequence. 361, 366, and 541. The enzyme activity was detected and the iron content was significantly lower. The difference between 128 and 356 days is due to the low enzyme activity and iron content. 426. The activity of the wild type was 5% lower than that of the wild type, and the iron content was higher than that of the wild type. The recovery rate of enzyme protein was very low in 384 and 393 cases, and the enzyme protein recovery rate was very low in 393 cases. The enzyme protein recovery rate was very low in 393 cases. The enzyme protein recovery rate was very low in 393 cases. The enzyme protein recovery rate was very low in 393 cases. The enzyme protein recovery rate was very low in 384 and 393 cases. The enzyme protein recovery rate was very low in 393 cases. The enzyme protein recovery rate was very low in 393 cases. The above results show that the 12-amino acid residues in white blood cells are 361,366 and 541 amino acid residues, which are important for iron binding and enzyme catalytic function.