単球/マクロファージの分化を調節する生理活性物質の精製とcDNAクローニング

调节单核细胞/巨噬细胞分化的生理活性物质的纯化和cDNA克隆

• 批准号: 08671189
• 负责人: 福生 吉裕
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Nippon Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08671189/
• 关键词: 単球分化抑制因子; マクロファージ; 動脈硬化; 胸腺; サイモスポリン; 脱泡沫化; 分化抑制; サイトカイン

【研究目的】血管壁内へ侵入した単球は分化し変性LDLを貪食し泡沫細胞となり、動脈硬化形成に進行する。この単球の分化を抑えることは泡沫細胞形成を抑制することであり、プラークの破裂の抑制に繋がる。これまでモルモット胸腺からの抽出液がその単球分化抑制をおこなうことを見いだし、その因子の精製と物理化学的性質の解明をおこなった。【経過について】材料:これまでの経験によりモルモット胸腺(100匹分)を出発点とし、アミノ酸分析まで到達できた。【活性アッセイ法の改良について】マクロファージとして分化することにより培養皿に接着することを利用しMTT法によるアッセイ系を用いている。この方法は客観的に分化抑制を数値化してその活性を測定できる利点が有り、再現性にとむ。モルモット胸腺よりマクロファージの分化を抑制する因子を得た。【結果】活性因子の性状について。i) 分子量は60kDAの酸性糖蛋白である。ii) THP-1細胞ばかりでなく、ヒト単球の分化も抑制する。iii) 表面抗原CD36の発現を著明に抑制した。iv) IL-10とは異なる因子であった。v) アミノ酸部分解析を得た。この結果カルボキシルエステラーゼと相同性が高いことが判明した。vi) 各種carboxylesteraseとの活性比較を行った。その結果carboxylesteraseには数種のサブタイプが存在し、それぞれの生理的役割についても異なることが判明した。pigおよびhuman carboxylesteraseには単球系細胞分化抑制活性は認められないが、monkey carboxylesteraseは分化抑制活性を有している。

[Objective] Invasion of the blood vessel wall, differentiation of LDL, bulimia, formation of atherosclerosis The inhibition of cell differentiation and foam cell formation The extract of the thymus gland is purified and the physicochemical properties of the extract are clarified. [] Material: This is the first time that the acid analysis has been carried out. [Improved MTT assay] The use of MTT assay in culture This method is based on the quantitative analysis of guest differentiation inhibition, the determination of activity, and the reproducibility of the results. The difference between the two is that [Results] The characteristics of active factors were investigated. i) Acid glycoprotein with molecular weight of 60kDA. ii) THP-1 cell differentiation inhibition. iii) The expression of CD36 antigen was clearly inhibited. iv) IL-10 is a factor of variation. v) Analysis of acid components. The result is that the similarity between the two is high. vi) Comparison of the activities of various carboxylesterases. As a result, several kinds of carboxylesterase exist, and the physiological function of carboxylesterase is different. Pig and human carboxylesterase have inhibitory activity against differentiation of human myeloid cells. Monkey carboxylesterase has inhibitory activity against differentiation of human myeloid cells.