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チロシンホスファターゼSHP-2の標的基質蛋白質に関する研究

酪氨酸磷酸酶SHP-2靶底物蛋白的研究

基本信息

批准号：
10152240
负责人：
的崎尚
金额：
$ 3.2万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10152240/
关键词：
チロシンホスファターゼ SHP-2 SHPS-1 Ras MAPキナーゼ

项目摘要

研究代表者は、src-ホモロジー2領域(SH2ドメイン)を有しているPTPase、SHP-2を発見し以後一貫してこのPTPaseの細胞増殖機構における生理的役割につき研究を継続している。SHP-2は、様々な増殖因子刺激によるRas/MAPキナーゼの活性化に重要な役割を果たしている。SHP-2の生理機能を明らかにする上で、最近、私達は、SHP-2の結合基質蛋白質SHPS-1(SHP Substrate-1)の遺伝子クローニングに成功している。SHPS-1は、分子量120kDaの受容体型の糖化膜蛋白質で、4個のYXXL/V/Iチロシンリン酸化モチーフを細胞内部分に有している。増殖因子刺激や細胞接着刺激等によりSHP-2はSHPS-1と複合体を形成することにより活性化され、Ras/MAPキナーゼカスケードを活性化する可能性が想定される。しかしながら、SHPS-1/SHP-2複合体による、Ras/MAPキナーゼ活性化の詳細な機序は未だ不明である。そこで、本研究計画においては、以下の研究を行った。[1]SHPS-1の細胞内、外ドメインに対する結合分子の同定免疫グロブリンFc領域との融合蛋白とした可溶性SHPS-1細胞外ドメインを大量に精製し、これを探子として、SHPS-1リガンド候補蛋白質の解析を行った。肝臓、及び脳にSHPS-1リガンドの存在を示唆する結果を得ている。現在、Cos細胞を用いた発現クローニングを行っている。一方、SHPS-1の細胞内ドメインに結合する蛋白質を酵母LexA-Two-Hybrid Systcmを用いスクリーニングしたが、有望なクローンは得られなかった。[2]SHS-1遺伝破壊マウスの作製と解析SHPS-1遺伝子破壊マウスを作製した。[3]新規SHP-2結合基質蛋白質の同定SHP-2結合基質蛋白質は、PTPase活性を喪失した変異型SHP-2を強制発現させた際には、高度にチロシンリン酸化され且つSHP-2と安定な複合体を形成する分子量100K蛋白質を精製した。

Research representative は, src-ホモロジー2 field (SH2ドメイン) を有しているPTPase, SHP-2 From now on, we will continue to study PTPase's cell proliferation mechanism and perform physiological research on it. SHP-2 and 様々な proliferative factors stimulate the activation of Ras/MAP キナーゼに, which is an important factor in stimulating the activation of にしている. The physiological functions of SHP-2 are as follows: Recently, SHP-2 binds to the matrix protein SHPS-1 (SHP Substrate-1) and is successful. SHPS-1, an acceptor-type glycosylated membrane protein with a molecular weight of 120 kDa, and four YXXL/V/I acid-containing intracellular parts. Proliferation factors stimulate cells and then stimulate the formation of SHP-2 and SHPS-1 complexes.によりactivationされ、Ras/MAPキナーゼカスケードをactivationするpossibilityがscenarioされる.しかしながら, SHPS-1/SHP-2 complex による, Ras/MAP キナーゼactivation のdetailed mechanism sequence is unknown である.そこで、This research project においては、The following research を行った. [1]SHPS-1 intracellular and extracellular fusion protein binding molecule and soluble immune protein Fc domain SHPS-1 extracellular purified protein, large amount of purified protein, SHPS-1 protein candidate protein analyzer. Liver disease, and the existence of SHPS-1 び脳にリガンドの shows the results are obtained. Now, the Cos cells are used and are now in use. One side, SHPS-1 intracellular protein binding protein yeast LexA-Two-Hybrid Systcmを用いスクリーニングしたが、Hopeなクローンは得られなかった. [2] Analysis of the production of SHS-1 缝子波壊マウスの SHPS-1 缝子波壊マウスをした. [3] The new SHP-2 binds to the matrix protein, the same SHP-2 binds to the matrix protein, and the PTPase activity is lost, and the heterogeneous SHP-2 is strong It is a purified protein with a molecular weight of 100K and is made from a highly acidified and highly acidified SHP-2 and stable complex.