チロシンホスファターゼSHP-2の標的基質蛋白質に関する研究

酪氨酸磷酸酶SHP-2靶底物蛋白的研究

• 批准号: 10152240
• 负责人: 的崎 尚
• 金额: $ 3.2万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10152240/
• 关键词: チロシンホスファターゼ; SHP-2; SHPS-1; Ras; MAPキナーゼ

研究代表者は、src-ホモロジー2領域(SH2ドメイン)を有しているPTPase、SHP-2を発見し以後一貫してこのPTPaseの細胞増殖機構における生理的役割につき研究を継続している。SHP-2は、様々な増殖因子刺激によるRas/MAPキナーゼの活性化に重要な役割を果たしている。SHP-2の生理機能を明らかにする上で、最近、私達は、SHP-2の結合基質蛋白質SHPS-1(SHP Substrate-1)の遺伝子クローニングに成功している。SHPS-1は、分子量120kDaの受容体型の糖化膜蛋白質で、4個のYXXL/V/Iチロシンリン酸化モチーフを細胞内部分に有している。増殖因子刺激や細胞接着刺激等によりSHP-2はSHPS-1と複合体を形成することにより活性化され、Ras/MAPキナーゼカスケードを活性化する可能性が想定される。しかしながら、SHPS-1/SHP-2複合体による、Ras/MAPキナーゼ活性化の詳細な機序は未だ不明である。そこで、本研究計画においては、以下の研究を行った。[1]SHPS-1の細胞内、外ドメインに対する結合分子の同定免疫グロブリンFc領域との融合蛋白とした可溶性SHPS-1細胞外ドメインを大量に精製し、これを探子として、SHPS-1リガンド候補蛋白質の解析を行った。肝臓、及び脳にSHPS-1リガンドの存在を示唆する結果を得ている。現在、Cos細胞を用いた発現クローニングを行っている。一方、SHPS-1の細胞内ドメインに結合する蛋白質を酵母LexA-Two-Hybrid Systcmを用いスクリーニングしたが、有望なクローンは得られなかった。[2]SHS-1遺伝破壊マウスの作製と解析SHPS-1遺伝子破壊マウスを作製した。[3]新規SHP-2結合基質蛋白質の同定SHP-2結合基質蛋白質は、PTPase活性を喪失した変異型SHP-2を強制発現させた際には、高度にチロシンリン酸化され且つSHP-2と安定な複合体を形成する分子量100K蛋白質を精製した。

The research representative has been studying the physiological function of PTase and SHP-2 since their discovery in SRC-SHP-2 domain. SHP-2 responds to growth factor stimulation by Ras/MAP and activates important genes. The physiological functions of SHP-2 are now well understood. Recently, SHP has successfully developed the genetic modification of SHP-2's binding matrix protein SHPS-1(SHP Substrate-1). SHPS-1 is a receptor-type glycation membrane protein with a molecular weight of 120kDa, and four YXXL/V/I residues are present in the intracellular portion. The possibility of activation of SHP-2 and SHPS-1 complex by proliferation factor stimulation and subsequent stimulation is also discussed. SHPS-1/SHP-2 complex, Ras/MAP complex, detailed activation mechanism is unknown. The following research projects were carried out. [1]SHPS-1 intracellular and extracellular binding molecules were identified and purified in large quantities from fusion proteins in Fc domain and soluble SHPS-1 extracellular binding molecules. The results show that there is a significant difference between the liver, liver, and kidney functions of SHPS-1. Now, Cos cells can be used to develop new technologies. One side, SHPS-1 intracellular protein binding, yeast LexA-Two-Hybrid Systcm use in the middle of the day, hope to get the right answer. [2] Analysis of SHS-1 gene mutation and its mechanism [3]New SHP-2 binding matrix protein isoform SHP-2 binding matrix protein loss of PTase activity, variant SHP-2 stress development, high degree of acidification and formation of SHP-2 stable complex, molecular weight 100K protein purification

项目成果

Kuroda, N.: "Differential expression of SHP2,a protein-tyrosine phosphatase with SRC homology-2 domins,in various types of renal tumor." Virchows Arch.433・4. 331-339 (1998)

Kuroda, N.：“SHP2（一种具有 SRC 同源性 2 结构域的蛋白质酪氨酸磷酸酶）在各种类型的肾肿瘤中的差异表达。”433·4 (1998)。

Ogawa,W.: "Role of binding proteins to IRS-1 in insulin signalling." Mol.Cell.Biochem.182・1-2. 13-22 (1998)

小川，W.：“IRS-1 结合蛋白在胰岛素信号传导中的作用。”Mol.Cell.Biochem.182·1-22 (1998)。

Takeda,H.: "Lysophosphatidic acid-induced association of SHP-2 with SHPS-1:Roles of RHO,FAK,and a SRC family kinase." Oncogene. 16・23. 3019-3028 (1998)

Takeda, H.：“溶血磷脂酸诱导的 SHP-2 与 SHPS-1 的关联：RHO、FAK 和 SRC 家族激酶的作用。”16・23 (1998)。

Takada,T.: "Roles of the complex formation of SHPS-1 with SHP-2 in insulin-stimulated MAP kinase activation." J.Biol.Chem.273・15. 9234-9242 (1998)

Takada, T.：“SHPS-1 与 SHP-2 的复合物在胰岛素刺激的 MAP 激酶激活中的作用。”J.Biol.Chem.273·15（1998）。

Tsuda,M.: "Integrin-mediated tyrosine phosphorylation of SHPS-1 and its associaton with SHP-2 : Roles of FAK and SRC family kinases." J.Biol.Chem.273・21. 13223-13229 (1998)

Tsuda, M.：“SHPS-1 的整合素介导的酪氨酸磷酸化及其与 SHP-2 的关联：FAK 和 SRC 家族激酶的作用。”J.Biol.Chem.273·21（1998）。