糖鎖合成酵素遺伝子の癌細胞特異的発現制御領域の解析とその遺伝子治療への応用

糖链合酶基因癌细胞特异性表达控制区分析及其在基因治疗中的应用

• 批准号: 10153223
• 负责人: 古川 圭子
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10153223/
• 关键词: 糖転移酵素; メラノーマ; ガングリオシド; プロモーター; 遺伝子発現; 転写因子; ルシフェラーゼ

神経外胚葉系由来のヒトメラノーマやT細胞白血病細胞では、酸性糖脂質GD3の特徴的な発現が認められる。そこでGD3合成酵素ゲノム遺伝子の構造と転写調節領域を解析し、以下の結果を得た。GD3合成酵素ゲノム遺伝子は、1、5個のエキソンより構成され、転写開始点は、約-525nt(+1:A of ATG)に存在した。2、本酵素遺伝子強発現メラノーマ細胞株おいて、本酵素遺伝子5'上流域約2.3kbに存在するプロモーター/エンハンサー活性は弱かったが、これにSV40エンハンサーを付加することにより明らかなプロモーター活性が検出された。また、このプロモーター活性は本酵素遺伝子非発現細胞株では、検出されなかった。3、5'上流域の段階的欠失変異ルシフェラーゼ活性の検討により、-1023〜-746ntに遺伝子発現に一致したプロモーター活性が検出された。4、この領域にはTATAボックスはなく、GCボックスが存在し、既知の転写因子結合モチーフを検索した結果、CREB、c-Myb、v-Myb.GATA.MAF1、Sp1等の結合モチーフが存在した。現在までに、ヒトメラノーマのsurvival factorとして、CREBが作用していること、また、c-MybがFGF-2を間接的にtransactivationしてFGF-2を介したメラノーマのautocrine growthに関与していることが報告されている。このような知見を考慮して、今後、GD3合成酵素遺伝子発現におけるこれらの転写因子の関与について詳細に検討を進める。また、本酵素遺伝子の5'上流域-1023〜-746ntに検出された強いメラノーマ特異的プロモーター活性を応用することにより、メラノーマ特異的遺伝子治療の開発に発展させる。

The origin of neuroectodermal lineage and the development of characteristics of acidic glycolipid GD3 in T cell leukemia cells were identified. The structure and regulatory domain of GD3 synthase were analyzed. The following results were obtained. GD3 synthase consists of 1 or 5 amino acids, and its starting point is about-525nt(+1:A of ATG). 2. The enzyme gene is strongly expressed in the cell line. About 2.3 kb of the enzyme gene is present in the 5'upper region of the cell line. The enzyme gene activity is weak. The SV40 gene activity is weak. The enzyme activity was detected in non-producing cell lines. 3. The activity of the 5'upper watershed was detected by the detection of the missing gene from-1023 to-746nt. 4. This domain contains TATA, GC, and other factors known to exist, such as CREB, c-Myb, v-Myb, GATA, MAF1, and Sp1. The results of this study are as follows: 1. The survival factor of c-Myb and FGF-2 is related to the autocrine growth of c-Myb and FGF-2. This knowledge is considered and discussed in detail in the future. In addition, the 5'upstream region of this enzyme gene-1023 ~-746nt was detected, and the development of strong and specific gene therapy was carried out.

项目成果

Alam Khorshed S.M.: "Expression and purification of a mutant human growth hormone that is resistant to proteolytic cleavage by thrombin, plasmin and human plasma in vitro." J.Biotechnol.65. 183-190 (1998)

Alam Khorshed S.M.：“一种突变型人类生长激素的表达和纯化，该激素在体外能够抵抗凝血酶、纤溶酶和人血浆的蛋白水解切割。”

Fukumoto Satoshi: "Expression cloning of mouse cDNA of CMP-NeuAc : lactosylceramide α2,3-sialyltransferase (GM3 synthase), an enzyme that initiates the synthesis of gangliosides." J.Biol.Chem.in press.

Satoshi Fukumoto：“CMP-NeuAc 的小鼠 cDNA 的表达克隆：乳糖神经酰胺 α2,3-唾液酸转移酶（GM3 合酶），一种启动神经节苷脂合成的酶，见 J.Biol.Chem.in press。”