人工的ARS配列を用いた分裂酵母複製開始蛋白質同定の試み

尝试使用人工 ARS 序列鉴定裂殖酵母复制起始蛋白

• 批准号: 08878113
• 负责人: 村上 洋太
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08878113/
• 关键词: ARS配列; 分裂酵母; 染色体複製

分裂酵母では複製開始点をプラスミドとして自律複製できる配列(ARS)として同定できる。しかし、ARSの構造決定は冗長度が高いことや共通の配列が見つからないことから困難であった。私は機能は不明であるものの比較的良く保存それた配列として報告されている配列(MMACS)と類似の配列がどのARSにもくり返し存在することに注目した。そして、この配列を含むオリゴヌクレオチドを多数繰り返す事により人工的なARSを作成でき、用意に活性に必要なcis-elaemnt,trans-factorの解析ができるのではないかと考え検討した結果以下の結果を得た。1,MMACSを含む30bpのオリゴヌクレオチドを作成し、これをそれぞれ4,8,16コピーもつプラスミドを作成した。このプラスミドのARS活性を測定するとコピーの数が増えるにしたがって強いARS活性をしめすことがわかった。ただし16コピーのものでも通常のARSより活性は弱い。分裂酵母のARSはfull activityには1kb程度必要なので人工ARSの場合も30コピー程度のものをつくれば高いARS活性をもつことが予想できるが、大腸菌ではこのような繰返し配列は不安定なために試すことができなかった。2,くり返し配列に結合する蛋白質を検索しAbp1,2を精製した。このうちAbp1について解析を進めた結果確かに複製開始に関与していることを示唆する結果を得た。

The starting point of mitotic yeast replication is self-regulated replication (ARS). The starting point of replication is identical to that of conventional replication. The information system and the ARS system determine the length of the data, the number of shares in common, and the number of items in the column. The private machine is able to save the information that you do not know how to make a comparison. It is similar to the configuration of reports and reports. The type of configuration (MMACS) is similar to that of the ARS server. The following results are obtained in the following results: the artificial ARS is used to make the device, and it is necessary to use the cis-elaemnt,trans-factor to analyze the test result. (1) 30bp MMACs contains the following words: "make a dog", "make a dog", make a dog, make a dog. The ARS activity was measured. The number of ARS activity was measured. In general, the ARS activity is weak. It is necessary to divide yeast "ARS" full activity "1kb" with artificial ARS "30", "high ARS activity", "high ARS activity", "big bacteria", "unstable", "unstable", "unstable" and "unstable". 2. Return to the column to combine the protein protein with the Abp1,2 concentrate. Please verify that the start of the copy and the failure of the Abp1 system show that the results are successful.

项目成果

Yota Murakami: "Identification,purification and molecular cloning of autonomously replicating sequence from fission yeast." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 93. 502-507 (1996)

Yota Murakami：“裂殖酵母自主复制序列的鉴定、纯化和分子克隆。”