サイクリン分解の分子機構の解析

细胞周期蛋白降解的分子机制分析

• 批准号: 10160210
• 负责人: 徳元 俊伸
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Shizuoka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10160210/
• 关键词: サイクリン; プロテアソーム; タンパク質分解; CDNAクローニング

サイクリンBの分解は受精直後の卵に見られるばかりでなく、体細胞分裂における分裂期から間期への移行時に普遍的に見られると考えられる。各種変異サイクリンを用いた実験からサイクリンの分解は細胞分裂に必須であることが明らかにされているが、その分解機構に関しては不明な点が多い。申請者は、精製26SプロテアソームがサイクリンBのN末端を限定分解するという結果を得ている。そこで、卵成熟、つまり減数分裂期に重要なプロテアーゼとしてプロテアソームに焦点を絞り、分裂期に必須なサイクリンBのプロテアソームによる分解機構を解明することを目的として研究を進めてきた。これまでにリコンビナントサイクリンBを用いた実験から、26Sプロテアソームがサイクリンの限定分解を介してMPFの不活性化を行なうことを確証した。次にプロテアソームによる限定分解後から完全分解に至る過程がユビキチン系を介するものであるかどうか、卵内のユビキチン化酵素を精製し、サイクリンB分解中間体のユビキチン化を調べることで明らかにする。そこで、まずサイクリンBのユビキチン化部位と想定されているリジンリッチ領域内の6箇所のりジン残基の点突然変異体を作製した。一方、分解に必須であることが示されているサイクリンBのディストラクションボックスの点突然変異体も作製した。これら8種類の点突然変異体を用いた分解実験によりディストラクションボックスは26Sプロテアソームの認識配列にになっていること、N末端から61番目のリジン残基がユビキチン化部位である可能性が高いことが明らかになった。さらに、ユビキチン化酵素の一つであるE2-CのcDNAクローニングにも成功し、他のユビキチン化酵素群の同定も進めている。今後は精製26Sプロテアソームとユビキチン化酵素群を組み合わせた再構成系を構築し、サイクリン分解の分子メカニズムの全体像を明らかにする。

When the egg is fertilized, the somatic cell divides and the interphase transitions are common. All kinds of different kinds of decomposition mechanisms are necessary for cell division. The applicant refined the 26S profile and the N-terminal of the profile B. The results were satisfactory. In the process of egg maturation, meiosis is an important stage in the study of the decomposition mechanism of meiosis. This is a confirmation of the limited decomposition of the MPF in the case of the use of the 26S solution. The second step is to modify the decomposition process of the intermediate after limited decomposition, complete decomposition, purification of the enzyme in the egg, and modulation of the decomposition intermediate. The six residues in the domain of the protein B are suddenly changed. A party, decomposition must be set up to show that the point of sudden change in the system 8 kinds of point suddenly change the use of the decomposition of the 26S solution to understand the alignment of the N-terminal 61-point residue to the high probability of the conversion of the site The E2-C cDNA sequence was successfully identified by the enzyme sequence, and the enzyme sequence was identified by the enzyme sequence. In the future, the purification of 26S protein and protein enzyme groups will be carried out by constructing and reconstituting the whole image of the protein and protein decomposition system.

项目成果

Toshinobu Tokumoto: "Disappearance of a novel protem component of the 265 proteasome during Xenopus oocyce maturation" Experimental Cell Research. (in press).

Toshinobu Tokumoto：“非洲爪蟾卵母细胞成熟过程中 265 蛋白酶体的新型蛋白质成分消失”实验细胞研究。

Motoki Toyama: "Characterization of active proteasome (265 proteasome) involved in Bufo japonicus oocyce maturation" Biomedical Research. 19・4. 253-260 (1998)

Motoki Toyama：“参与蟾蜍卵母细胞成熟的活性蛋白酶体（265蛋白酶体）的表征”生物医学研究19・4（1998）。

Ryo Horiguchi: "Molecular cloning of the goldfish,Carasius auratus,gene α2-ca encoding a zos proteaseme α-type Subunit and its expression analysis" Zoological Science. 15・5. 773-777 (1998)

Ryo Horiguchi：“金鱼鲫鱼编码zos蛋白酶α型亚基的基因α2-ca的分子克隆及其表达分析”动物学15・5（1998）。

Toshinobu Tokumoto: "Nature and role of proteasomes in maturation of fish oocyces" International Review of Cytology. 186. 261-294 (1999)

Toshinobu Tokumoto：“蛋白酶体在鱼卵母细胞成熟中的性质和作用”国际细胞学评论。