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培養細胞系を用いたWnt/Winglessシグナル伝達経路の生化学的解析

使用培养细胞系对 Wnt/Wingless 信号通路进行生化分析

基本信息

批准号：
10171216
负责人：
柳川伸一
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10171216/
关键词：
Wnt Wingless シグナル伝達発生

项目摘要

Wnt/Wingless(Wg)内情報伝達経路について、その生化学的解析に理想的なDrosophila翅原基由来細胞clone-8を用いた培養細胞系を確立し、この系を用いて、Wg経路で生じる生化学的変化につき解析した。1) Wnt/Wgシグナル伝達におけるマウス及びDrosophila Axin分子の機能に関する比較解析Axinはβカテニン、GSK3-βそして癌抑制遺伝子産物APCをともに直接結合するドッキング蛋白質であり、GSK3-βによるβカテニンの特異的リン酸化を著しく促進する事によって、βカテニン蛋白量を負に調節していると考えられている。このAxinはβカテニンの負の制御因子であるとの報告に対し、我々はDrosophilaのSchneider S2細胞内でマウスAxin蛋白質を強制発現すると、著しいArmの蓄積が誘導されることを見いだした。この効果の分子機構を解析した結果、マウスAxin蛋白質の過剰発現により、S2細胞内で、マウスAxin,ZW3からなる複合体が多く形成される為に、Armの分解を促進する機能を備えたDrosophia Axin,ZW3,Armの三者を含む複合体の形成が阻害され、Arm蛋白の蓄積が生じると考えられた。2) マウスDishevelled,Dvl-1,Dvl-2のWnt/Wgシグナル伝達経路における生化学的機能の解明マウスNIH3T3,L,C57MG細胞を可溶性Wnt-3A蛋白で3時間処理すると、βカテニン蛋白の著しい細胞質内蓄積が観察され、さらにそれと同時にDvl-1,2分子のSer/Thrリン酸化の亢進が生じた。ここに始めてDshと同様に、DvlもWnt刺激によりリン酸化を受け、活性化されることが確認された。

Wnt/Wingless(Wg) information transmission pathway analysis, biochemical analysis, ideal Drosophila primordium derived cell clone-8 culture cell line establishment, application, Wg pathway development, biochemical analysis. 1)Comparative analysis of the functional relationship between Wnt/Wg protein expression and Drosophila Axin. Axin binds directly to β-protein, GSK3-β and APC, a cancer suppressor gene product. Axin negatively regulates β-protein expression and promotes β-protein specific acidification. Axin protein expression in Drosophila Schneider S2 cells was induced by stress. Analysis of molecular mechanism of these effects: detection of Axin protein in S2 cells, inhibition of Axin, ZW3 and Arm protein accumulation in S2 cells, promotion of Arm decomposition and formation of complex. 2)The biochemical function of Wnt/Wg protein in Dvl-1,Dvl-2 expression pathway was investigated in NIH 3T3,L, C57MG cells. The soluble Wnt-3A protein was detected by intracellular accumulation and hyperacidification of Dvl-1,2 molecules. The first step is to activate the enzyme and activate it.