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WntシグナルによるArmadillo/βカテニン蛋白の分解制御機構の解析

Wnt信号控制犰狳/β-catenin蛋白降解的机制分析

基本信息

批准号：
11144219
负责人：
柳川伸一
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11144219/
关键词：
Wnt シグナル伝達 Armadillo β-カテニンプロテアソーム

项目摘要

Wnt/Wingless(Wg)シグナル伝達経路の主要な構成員は、Scaffold蛋白であるAxinに結合して大きな複合体を形成し、β-カテニン/Am(Arm)蛋白質の分解制御装置として機能している。マウスとDrosophilaのAxinのアミノ酸配列を比較すると、癌抑制遺伝子産物APCを結合するRGSドメインとC-末端のDIXドメイン以外には、非常に高い相同性は認められない。そこで様々のDaxinの欠損変異体を、Wgに感受性を持つDrosophila培養細胞S2R+に導入し、そのWgシグナル伝達に対する効果を検討した。細胞内Armレベルへの影響、シグナル伝達経路の主要な構成員との結合性、並びにTcf依存性転写活性化を指標として各変異体の機能を解析した結果、1)Arm及びZw3と分子中央部で、またC-末端部でDishevclled(Dsh)及びProtein phosphatase 2Aと結合する事、2)Wgシグナル伝達の阻害には、N-末端からArm結合部位で十分であり、またC-末端部だけからなる変異体はDominant-negativeとなりArm蓄積を誘導する事、3)細胞内でのDshとDaxinのco-localizationが認められる事、4)Wg刺激によりDaxinは低リン酸化型となる事、5)DaxinはWg,Dsh,全長ArmによるTcf依存性転写活性化を阻害出来るが、N-末端にあるリン酸化標的配列を欠いたArmによる転写活性化は阻害出来ない事が明らかとなった。6)またキナーゼ活性を欠くZw3もDaxinと結合する事から、このZw3変異体が持つ強いArm誘導活性の分子機構が明らかとなった。

Wnt/Wingless(Wg) is a major component of the protein pathway, and its function is to form a large complex of Scaffold protein, Axin, and β-Scaffold/Am(Arm) protein. Compared with Drosophila's Axin, the cancer suppressor gene APC binds to RGS, and the C-terminal DIX has a very high identity. To investigate the effects of introducing Daxin into S2R + cells and its sensitivity to Daxin The effects of intracellular arm protein on the binding and binding of the main structural members of the arm protein pathway, and the Tcf dependence on the activity of the enzyme, and the analysis of the function of each variant, 1) the central and C-terminal parts of the Arm and Zw3 molecules, Dishevclled(Dsh) and Protein phosphatase 2A, and binding, 2) the N-terminal part of the arm protein pathway, and the inhibition of the arm protein pathway. 3) Daxin co-localization in cells; 4) Daxin low-level acidification induced by Wg stimulation; 5)Daxin Tcf-dependent transcription activation inhibited by Wg,Dsh, full-length Arm; N-terminal transcription activation inhibited by N-terminal transcription of Daxin. 6) The molecular mechanism of strong arm-induced activity is clearly identified by Zw3-Daxin binding.