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培養細胞系を用いたWnt/Winglessシグナル伝達経路の生化学的解析

使用培养细胞系对 Wnt/Wingless 信号通路进行生化分析

基本信息

批准号：
11152215
负责人：
柳川伸一
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11152215/
关键词：
Wnt Wingless シグナル伝達発生

项目摘要

Dsh蛋白質はWnt/Wgシグナル並びにPlanar Polarityシグナルに関わるJNK経路を仲介する多機能のシグナルトランスデューサーで、Drosophila、マウスの多くの組織に恒常的な発現が認められる。DIX、PDZドメインがWnt/Wgシグナルに必須であり、またDEPドメインがJNKシグナルに関わる。最近生物活性を保ったWnt-3a標品が使用可能となった為、Wntシグナル伝達にともなってDvl-1,2分子が示す生化学的変化の性状を、マウスやヒトの各種培養細胞を用いて解析し、Dshファミリー蛋白質の基本的機能を同定する事を試みた。まず、1)マウスNIH3T3,L,C57MG細胞を可溶性Wnt-3a蛋白で3時間処理すると、βカテニン蛋白の著しい細胞質内蓄積が観察され、さらにそれと同時にDvl-1,2分子のSer/Thrリン酸化の亢進に伴うバンドシフトが生じた。ここに初めてDshと同様に、DvlもWnt刺激によりリン酸化を受け、活性化される可能性が示された。2)Dvl-1,2分子の動物細胞での強制発現はアポトーシスを誘導した。しかしDrosophilaのclone8翅原基細胞やSchneider S2細胞では、メタロチオネイン誘導型ベクターを用いる事によってDvl-1,2分子の誘導発現をする細胞株の樹立が可能で、強制発現させるとDrosophilaのDshの場合と同様に、Arm蛋白の蓄積ならびにDE-cadherin誘導、そして、Dvl-1,2分子の高度のSer/Thrリン酸化が生じた。Dvl-1,2蛋白はclone8細胞内の主に細胞質に斑点状に局在した。3)更にDsh,及びDvl-1,2分子には、ともに免疫共沈されてくるプロテインキナーゼが存在し、そのうちの一つはPDZドメインに結合するCasein kinase IIであった。4)さらに、Dvl-1,2蛋白の強制発現はZW3によるTauリン酸化活性を阻害する事を、リン酸化型特異的抗Tau抗体を用いたIn vivo assayによって初めて明らかにした。5)またSchneider S2細胞内でのDsh,及びDvl-1,2過剰発現によるArm蛋白の蓄積はCasein kinase Iの特異的阻害剤であるCKI-7により完全に消失した。6)現在Dvl-1,2分子の強制発現によるJNK経路の活性化機構についてリン酸化型特異的Jun抗体を用いて検討中である。

Dsh protein is sensitive to Wnt/Wg and Planar Polarity to JNK media. Multi-machine can be used to monitor the performance of multiple organizations, such as Drosophila, POS, and so on. DIX, PDZ, DEP, DEP, JNK, and so on, must be affected. Recently, bioactive Wnt-3a labeling products have been used to determine the biochemical properties of biochemistry, the molecular weight of Wnt, the biochemical properties of biochemistry, the analysis of all kinds of culture cells, and the basic mechanism of Dsh protein assay. 1) the soluble Wnt-3a protein in the NIH3T3,L,C57MG cell was incubated for 3 hours, and the β-protein protein was stored in the cell to observe the enzyme, and the Dvl-1,2 molecule Ser/Thr acidification was enhanced at the same time. Initial Dsh stimulation, Dvl Wnt stimulation, acidification, and activation show that the possibility is the same. 2) Dvl-1,2 molecular kinetokines are used to force the presence of molecular pathogens. The Drosophila wing primordia Schneider S2 cells, the Dvl-1,2 molecules, the Dvl-1,2 molecules, the cells, the Dsh primordia, the Arm proteins, the DE-cadherin guides, the Dvl-1,2 molecules, the Dvl-1,2 molecules, the cells, the cells. Dvl-1,2 protein "clone8" intracellular "master"cell" and "spotted" locality is present in the cell. 3) Dsh, immunoprecipitation and co-immunoprecipitation of Dvl-1,2 molecules, immune co-deposition, immune co-deposition, anti-tumor, anti-Casein kinase II, anti-Casein kinase II, anti-DNA, anti-DNA and anti-DNA. 4) ZW3, Dvl-1,2, Tau, acidification activity, anti-Tau antibody, acidified specific anti-Tau antibody, anti-DNA antibody and anti-DNA antibody. 5) the intracellular Dsh of Schneider S2, and the blocking effect of Arm protein on Casein kinase I specific protein were detected by Dvl-1,2. 6) now that the Dvl-1,2 molecule strengthens the activation of the JNK pathway, it is necessary to induce the use of acidified Jun antibodies.