培養細胞系を用いたWnt/Winglessシグナル伝達経路の生化学的解析

使用培养细胞系对 Wnt/Wingless 信号通路进行生化分析

• 批准号: 12026215
• 负责人: 柳川 伸一
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12026215/
• 关键词: Wnt; Wingless; Casein Kinase I; Signal transduction; Drosophila; RNAi

形態形成にかかわるシグナル分子Wnt/Wingless(Wg)の生物活性については、様々なモデル動物を用いて分子生物学的研究がなされいる。また各種のWntシグナル伝達異常によって引き起こされたβ-cateninの蓄積が細胞のの癌化の原因となっている事も知られている。本研究の目的は、Wnt/Wgに感受性を持つDrosophilaや哺乳動物の培養細胞と、可溶性のWnt/Wg蛋白を用いて、Wnt/Wgシグナル伝達に関わる遺伝子産物の生化学的相互作用の実体を解明する事である。最近Xenopus胚を用いた解析から、Casein kinase I(CKI)が、Wntシグナル伝達の正の制御因子であるとの報告がなされたが、その普遍性は他の動物系を用いて、検証されているわけではなかった。そこで、本研究ではDrosophilaの系を用いて、CKIのWgシグナル伝達経路における役割の解析を行った。Schneider S2R+細胞をDrosophilaのCKIα及びεのdouble stranded RNA(dsRNA)の存在下で培養するin vitro RNAi法を行って、CKIα及びε蛋白の産生を阻止した。するとXenopus胚を用いた結果に反し、著しいArmadillo(Arm)蛋白質の蓄積が生じた。なおRNAiによってArmのmRNAの変化は認められない事からCKIα及びε、はArm蛋白質の安定性を負に制御していることが明らかとなった。さらにDrosophilaの胚に同じdsRNAを注入して、胚におけるCKI蛋白の産生を阻止したところ、Wgシグナルが過剰に流れた事を意味するNaked cuticleの表現型を持つ胚が発生した。 これらの結果は、Drosophilaでは、CKIはWgシグナル伝達の負の制御因子として働いている事を示すものであった。

Morphogenetic に か か わ る シ グ ナ Wnt/Wingless ル molecules (Wg) の bioactive に つ い て は, others 々 な モ デ を ル animals with い て molecular biology が な さ れ い る. ま た various の Wnt シ グ ナ ル 伝 of abnormal に よ っ て lead き up こ さ れ た beta catenin の accumulation が cells の の canceration の reason と な っ て い る matter も know ら れ て い る. は の purpose, this study Wnt/Wg に susceptibility を hold つ Drosophila や mammals の culture cell と, soluble の Wnt/Wg protein を い て, Wnt/Wg シ グ ナ ル 伝 da に masato わ る heritage 伝 zi chan content の biochemical interactions の be body を interpret す る matter で あ る. Recent Xenopus embryo を with い た parsing か ら, Casein kinase (CKI) relationship I が, Wnt シ グ ナ ル 伝 da の is の suppression factor で あ る と の report が な さ れ た が, そ の universality は he の animal を with い て, 検 さ れ て い る わ け で は な か っ た. そ こ で, this study で は Drosophila の is を with い て, CKI の relationship Wg シ グ ナ ル 伝 da 経 road に お け cut の る service line analytical を っ た. Schneider S2R + cells を Drosophila の CKI alpha and relationship び epsilon の で in the presence of double stranded RNA (dsRNA) の cultivate す る in vitro RNAi method line を っ て, CKI alpha relationship and び epsilon produced の を stop し た. The するとXenopus embryo を is used with すると た, resulting in に reverse すると, and <s:1> the accumulation of <s:1> Armadillo(Arm) protein <s:1> が to produce じた. な お RNAi に よ っ て Arm の mRNA の variations change は recognize め ら れ な い matter か ら CKI alpha and relationship び epsilon, の は Arm protein stability を negative に suppression し て い る こ と が Ming ら か と な っ た. さ ら に Drosophila の embryo に with じ dsRNA を injection し て, embryo に お け る CKI produced の を relationship stop し た と こ ろ, Wg シ グ ナ ル が before turning に flow れ を た things mean す る Naked cuticle の phenotype を hold つ embryo が 発 raw し た. こ れ ら の results は, Drosophila で は, CKI は relationship Wg シ グ ナ ル 伝 da の negative の suppression factor と し て 働 い て い を る things in す も の で あ っ た.

项目成果

柳川伸一: "シグナルの交差点としてのDishevelled"細胞工学. 19巻・11号. 1616-1621 (2000)

柳川真一：“凌乱的信号交叉点”《细胞工程》第 19 卷，第 11 期。1616-1621 (2000)。

Shin-ichi Yanagawa: "Identification of Notch1 as a froguent target for provirus insertional mutagenesis in T-cell lymphomas induced by leukemogenic mutants of mouse mammary tumor virus."Jaurnal of Virology. 74巻・20号. 9786-9791 (2000)

Shin-ichi Yanakawa：“鉴定 Notch1 作为小鼠乳腺肿瘤病毒致白血病突变体诱导的原病毒插入突变的靶标。”病毒学杂志，第 74 卷，第 20 期，9786-9791。 ）

Shin-ichi Yanagawa: "Biochemical characterization of the Drosophila Axin protein."FEBS Letters. 474巻. 189-194 (2000)

Shin-ichi Yanakawa：“果蝇轴蛋白的生化特征。” FEBS Letters 474。189-194（2000）。