权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

オーガナイザーにおけるLIMホメオドメイン蛋白質Xlim-1の標的遺伝子の同定

组织器中LIM同源域蛋白Xlim-1靶基因的鉴定

基本信息

批准号：
09480204
负责人：
平良眞規
金额：
$ 8.83万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

LIMホメオボックス遺伝子Xlim-1はシュペーマン・オーガナイザーにおいて重要な役割を担っていることが示唆されている。Xlim-1は転写調節因子と考えられることより、Xlim-1の直接の標的遺伝子を同定することはオーガナイザーにおけるXlim-1の機能の分子メカニズムを明らかにするため不可欠と考えられる。そこで我々は活性型Xlim-1/3mによりアニマル・キャップで発現が上昇する既知の遺伝子を検索すると共に、Xlim-1/3mを発現させたアニマル・キャップとコントロール・アニマルキャップを用いた差し引きライブラリーを構築し、新規標的遺伝子を検索した。その結果、goosecoid(gsc)、Otx2、chrdin、cerberusおよび数個の新規遺伝子がアニマル・キャップにおいてXlim-1/3mにより発現が引き起こされ、かつオーガナイザー領域に発現していることが判明した。その中からXlim-1の標的遺伝子候補としてgsc、chordin、cerberus遺伝子のプロモーター解析を行った。chordinとcerberus遺伝子に関してはゲノム遺伝子のクローニングを行い、5'側非翻訳領域をルシフェラーゼ遺伝子につないだレポーター・コンストラクトを作成した。Xlim-1/3mに対するそれらの反応性を検討したところ、cerberusレポーター遺伝子がXlim-1/3mに反応しルシフェラーゼ活性を上昇させることが示された。今後はXlim-1/3mの反応領域をさらに絞り込む予定である。gscプロモーターに関しては既にDawid博士、Cho博士らと共同研究により開始していた解析を継続させた。野生型Xlim-1はLIMドメインの存在により活性型Xlim-1に比べ弱くしかgscプロモーターを活性化しない。しかしLIMドメイン結合蛋白質Ldb1とホメオドメイン蛋白質Otx2を共発現させることで相乗的に活性化することを見い出した。またホメオドメイン蛋白質GscとPV.1はXlim-1/Otx2/Ldb1による活性化を強く阻害した。以上の結果はgscとcerberusがXlim-1の直接の標的遺伝子であることが強く示唆している。またこれらの結果を元にオーガナイザーにおける転写因子間相互作用に関し議論する。

LIMホメオボックス伝子Xlim-1はシュペーマン・オーガナイザーにおいてimportantなServant Cutを聣ていることがshow唆されている. The adjustment factor of Xlim-1 is the same as that of Xlim-1.オーガナイザーになけるXlim-1/3mを発成させたアニマル・キャップとコントロール・アニマルキャップを Use the いた difference し cited きライブラリーを to build し, the new standard is the remaining を検検 Sol した.そのRESULTS, goosecoid(gsc), Otx2, chrdin, cerberusおよびseveralの新regulation缝子がアニマル・キャップにおいてXlim-1/3mにより発出入き出こされ、かつオーガナイザー地に発appears していることが clarifies した.その中からXlim-1の名的缝子 candidate としてgsc, chordin, cerberus 缝子のプロモーターanalytic を行った. Chordinとcerberus弝子に关してはゲノム伝子のクローニングを行い、5 'The side of the non-translated field is made of につないだレポーター・コンストラクトを. Xlim-1/3mに対するそれらのreflexiveを検したところ、cerberusレポーター伝子がXlim-1/3mに濜しルシフェラーゼActive をRISE させることが Show された. From now on, the reaction area of Xlim-1/3m will be determined. gsc プロモーターに寇してはにDr. Dawid and Dr. Cho らと jointly researched the によりしていたanalytic を継続させた. The wild-type Xlim-1 is active and the active type Xlim-1 is weaker than the active type Xlim-1.しかしLIMドメインbinding protein Ldb1とホメオドメインprotein O tx2's active activation is multiplied by the total appearance of the present.またホメオドメインprotein GscとPV.1はXlim-1/Otx2/Ldb1によるActivationをStrong and blockingした. The above results are the direct result of gsc's cerberus and Xlim-1's direct target.またこれらのRESULTを元にオーガナイザーにおける転Write the interaction between factors に关し Discussion する.