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オーガナイザーにおけるLIMホメオドメイン蛋白質Xlim-1の標的遺伝子の解析

组织器中LIM同源域蛋白Xlim-1的靶基因分析

基本信息

批准号：
12026211
负责人：
平良眞規
金额：
$ 0.9万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

アフリカツメガエルのオーガナイザーに発現するLIMホメオドメイン蛋白質Xlim-1はオーガナイザー活性に関与していることが示唆されている。したがってXlim-1の標的遺伝子を解析することでオーガナイザーにおける分子カスケードの一端を明らかにすることができると考えられる。そこで多分化能をもつ外胚葉外植体で活性化型Xlim-1/3mにより発現誘導される遺伝子を検索した結果、cerberus(cer)とレセプター・チロシン・キナーゼXror2が見い出されたことより、cer遺伝子のプロモーター解析とXror2の機能解析を行った。(1)cerberus遺伝子のプロモーター解析:cerberusのゲノム遺伝子のプロモーターをルシフェラーゼにつないだレポーター・コンストラクトを用いて解析した結果、(i)Xlim-1/3mの反応領域は0.58kbで十分であること、(ii)-141から-118の領域に含まれる3個のホメオドメイン結合配列TAATの点変異導入により、Xlim-1/3mおよび胚の背側での発現が大きく消失すること、(iii)Xlim-1/3mを発現させた胚の抽出物とのゲルシフト・アッセイによりXlim-1/3mは上記TAATに結合すること、(iv)野生型Xlim-1はホメオドメイン蛋白質Otx2、Siamoisと協調的に作用し、中胚葉・ホメオドメイン蛋白質Mix.1がこの協調性をさらに増強すること、が明かとなった。これらの結果はcerberusがXlim-1の直接の標的遺伝子であることを示唆している。(2)Xror2の機能解析:野生型Xror2および細胞内ドメイン欠失変異体Xror2-TMをアフリカツメガエル胚の腹側あるいは背側の中胚葉領域に過剰発現させ発生過程に対する影響を調べた結果、(i)Xror2とXror2-TMは共に細胞の分化形質を変化させないが、原腸陥入を引き起こす細胞運動の1つである収斂伸長運動を阻害すること、(ii)野生型および細胞内ドメインの欠失変異体Xror2-TM共に類似の活性を持つことより細胞外ドメインが活性に重要であること、が明かとなった。以上のようにXlim-1は標的遺伝子を介して神経誘導活性と細胞運動の双方に関与していることが示唆された。

I don't know. I don't know, I don't know. This is the parsing of the child of the "Xlim-1". This is the first step of the analysis. The multiple differentiation of the explants could induce the active Xlim-1/3m explants to detect the results of the induction tests, the results of the cerberus (cer) response response, the response response of the Xror2 explants, the response of the cer explants, and the analysis of the Xror2 profile. (1) the analysis of the results of the cerberus data collection: the analysis of the results of the Xlim-1/3m data analysis, (I) the analysis of the results, (I) the results of the analysis of the results, (I) the results of the analysis of the results of the (ii)-141n-118A field contains a combination of three customer accounts in combination with a train of TAAT points to import a license, a Xlim-1/3m terminal to have a negative effect on the disappearance of an airframe, (iii) a Xlim-1/3m to realize the embryo extract to obtain a negative effect, and a terminal Xlim-1/3m to be loaded with a combination of TAAT. (iv) wild-type Xlim-1 protein, Siamois protein, mesoembryonic protein, Mix.1 protein, protein. The results show that the child of cerberussia Xlim-1 is instigated by the child of the doctor. (2) Xror2 functional analysis: wild-type Xror2 malondialyse intracellular dysplasia, Xror2-TM blastocyst, abdominal dysplasia, mesoderm field, (I) Xror2 Xror2-TM symbiotic cell differentiation, cellular differentiation, and so on. The activity of ii is similar to that of Xror2-TM, which is similar to that of extracellular enzymes, which is important for the activity of extracellular enzymes. The children of the above-mentioned Xlim-1 customers recommend that God instructs the active cell to act as a sign of instigation between the two parties.