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αBクリスタリンのリン酸化とその生理的意義

αB晶状体蛋白的磷酸化及其生理意义

基本信息

批准号：
10172239
负责人：
加藤兼房
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Institute for Developmental Research, Aichi Human Service Center
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

(A) αBクリスタリンの三ヵ所のリン酸化部位(Ser 19,Ser 45,Ser 59)のリン酸化をそれぞれ認識する特異抗体を使って以下の事実を明らかにした。(1)ストレス負荷の有無とは無関係に、分裂期の細胞では細胞種を問わず普遍的にSer 45のリン酸化が高進していることを免疫組織学的に明らかにした。(2)分裂期の細胞を集め、細胞抽出液を等電点電気泳動(IEF)あるいはSDS-PAGE後に上記の抗体を用いてウエスタンブロットを行い、Ser 45のみならずSer 19のリン酸化も分裂細胞で高進しているのに対し、Ser 59のリン酸化は逆に抑制されていることを見つけた。(3)αBクリスタリンの三ヵ所のセリン残基それぞれをリン酸化する活性が、ウシレンズより精製した非リン酸化型のαB2クリスタリンをリシルエンドペプチダーゼで処理して得られるN末端72ペプチドを基質とし、生成されたリン酸化ペプチドを上記の抗体を用いて分析することにより測定できる方法を開発した。この方法を用いて、分裂期の細胞ではSer 45 kinaseとSer 19 kinaseの活性が高進し、ser 59 kinase活性が抑制されていることを明らかにした。(4)過酸化水素で処理したヒトグリオーマ細胞U373MGより。イオン交換カラムおよび分子ふるい力ラムを用いて、Ser 45 kinaseとSer 59 kinaseを部分精製し、Ser 45 kinaseはp44/42 MAP kinaseであり、Ser 59 kinaseはMAPKAP kinase-2であることを明らかにした。(B) αクリスタリン低分子量分子シャペロンの一員で我々の発見したp20がトロンビンによる血小板の凝集を抑制する作用があることを発見した。

(A) αBククリスタリンの三ヵのリン acidified site (Ser 19, Ser 45, Ser 59) のリン acidified をそれぞれ recognize するspecific antibody をmake って following の事実を明らかにした. (1) It does not matter whether the load is present or not, and it does not matter whether the cells are in the division period or not, and the type of cells in the division phase is universal. Ser 45のリンAcidified high-intensity していることをimmunohistology に明らかにした. (2) The cells collected during the division period and the cell extracts were subjected to isoelectric point electrophoresis (IEF) and SDS-PAGE. 45のみならずSer 19のリンacidified division of cells で高进しているのに対し、Ser 59のリンAcidification and reverse inhibition of acidification and inhibition of acidification. (3) αBククリスタリンの三ヵのセリン residue acidified active ingredient,ウシレンズより Refined した Non-リン acidified type のαB2 クリスタリンをリシルエンドペプThe チダーゼで treatment is used to obtain the られるN-terminal 72 ペプチドを matrix とし and generate されたリン acid The antibodies mentioned above were analyzed using the いて analysis method and the できる method was used. The method is to use いて, cells in the dividing phase, ではSer 45 kinase, とSer 19 kinase のactivity, high progress, されていることを明らかにした. (4) Over-acidified hydrogen-treated U373MG cells.イオン Exchange カラムおよびmolecule ふるい力ラムを用いて、Ser 45 kinaseとSer 59 kinaseをPartially refinedし、Ser 45 kinaseはp44/42 MAP kinaseであり、Ser 59 kinaseはMAPKAP kinase-2であることを明らかにした. (B) αクリスタリンLow molecular weight molecule シャペロンの一memberで我々の発见したp20がトロンビンによるPlatelet のaggregation をInhibition する effect があることを発见した.