αBクリスタリンのリン酸化とその生理的意義

αB晶状体蛋白的磷酸化及其生理意义

• 批准号: 10172239
• 负责人: 加藤 兼房
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Institute for Developmental Research, Aichi Human Service Center
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10172239/
• 关键词: クリスタリン; 分子シャペロン; リン酸化; 分裂細胞; MAPキナ-ゼ; MAPKAPキナーゼ; p20; 血小板

(A) αBクリスタリンの三ヵ所のリン酸化部位(Ser 19,Ser 45,Ser 59)のリン酸化をそれぞれ認識する特異抗体を使って以下の事実を明らかにした。(1)ストレス負荷の有無とは無関係に、分裂期の細胞では細胞種を問わず普遍的にSer 45のリン酸化が高進していることを免疫組織学的に明らかにした。(2)分裂期の細胞を集め、細胞抽出液を等電点電気泳動(IEF)あるいはSDS-PAGE後に上記の抗体を用いてウエスタンブロットを行い、Ser 45のみならずSer 19のリン酸化も分裂細胞で高進しているのに対し、Ser 59のリン酸化は逆に抑制されていることを見つけた。(3)αBクリスタリンの三ヵ所のセリン残基それぞれをリン酸化する活性が、ウシレンズより精製した非リン酸化型のαB2クリスタリンをリシルエンドペプチダーゼで処理して得られるN末端72ペプチドを基質とし、生成されたリン酸化ペプチドを上記の抗体を用いて分析することにより測定できる方法を開発した。この方法を用いて、分裂期の細胞ではSer 45 kinaseとSer 19 kinaseの活性が高進し、ser 59 kinase活性が抑制されていることを明らかにした。(4)過酸化水素で処理したヒトグリオーマ細胞U373MGより。イオン交換カラムおよび分子ふるい力ラムを用いて、Ser 45 kinaseとSer 59 kinaseを部分精製し、Ser 45 kinaseはp44/42 MAP kinaseであり、Ser 59 kinaseはMAPKAP kinase-2であることを明らかにした。(B) αクリスタリン低分子量分子シャペロンの一員で我々の発見したp20がトロンビンによる血小板の凝集を抑制する作用があることを発見した。

(A) alpha B ク リ ス タ リ ン の three ヵ の リ ン acidification site (Ser 19, Ser 45, Ser 59) の リ ン acidification を そ れ ぞ れ know す る specific antibody を っ て の below matter be を Ming ら か に し た. (1) ス ト レ ス load の presence of と は no masato に, split phase の cell で は cells of を asked わ ず common に Ser 45 の リ ン acidification が high into し て い る こ と を immune histological に Ming ら か に し た. (2) divide を set め の cell, extract を isoelectric point electric 気 swimming focusing (IEF) あ る い は に written after sds-page を の antibody with い て ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ ト を い, Ser 45 の み な ら ず Ser 19 の リ ン acidification も splinter cell で high into し て い る の に し seaborne, Ser 59 リ <s:1> acidification されて reverse に inhibition されて る けた とを see けた けた. (3) alpha B ク リ ス タ リ ン の three ヵ の セ リ ン residues そ れ ぞ れ を リ ン acidification す る active が, ウ シ レ ン ズ よ り refined し た non リ ン acidification の alpha type B2 ク リ ス タ リ ン を リ シ ル エ ン ド ペ プ チ ダ ー ゼ で 処 Richard し て have ら れ る N terminal 72 ペ プ チ ド を matrix と し, generate さ れ た リ ン acidification ペ プ チ ド を written を の antibody The て て analysis する とによ とによ とによ する determination で る る る method を development た. こ の way を with い て, divide の cells で は Ser 45 kinase と Ser 19 kinase activity の が high into し, Ser 59 kinase inhibition さ が れ て い る こ と を Ming ら か に し た. (4) Peroxylated hydrolysin で treated the U373MGよ たヒトグリ of the たヒトグリ で of the <s:1> of the of the たヒトグリ of the たヒトグリ of the たヒトグリ of the たヒトグリ of the たヒトグリ of the たヒトグリ of the たヒトグリ of the よ of the. The <s:1> <s:1> exchange カラムおよび molecule ふる the ラムを force ラムを is partially refined with て て, Ser 45 kinaseと, Ser 59 kinaseを, <s:1>, Ser 45 kinase <s:1> p44/42 MAP kinaseであ であ であ, Ser 59 kinase <e:1> MAPKAP kinase-2である に とを Ming ら に に た. (B) alpha ク リ ス タ リ ン low molecular weight molecules シ ャ ペ ロ ン one の で I 々 の 発 see し た p20 が ト ロ ン ビ ン に よ る の platelet agglutination を inhibit す る role が あ る こ と を 発 see し た.

项目成果

Kato,K.,et al.: "Phosphorylation of αB-crystallin in mitotic cells and identification of enzymatic activities responsible for phosphorylation." J.Biol.Chem.273. 28346-28354 (1998)

Kato, K., 等人：“有丝分裂细胞中 αB-晶状体蛋白的磷酸化和磷酸化酶活性的鉴定。J.Biol.Chem.273 (1998)。

加藤兼房: "神経系における低分子量分子シャペロンのストレス応答." 医学のあゆみ(神経細胞死制御). 別冊. 255-260 (1998)

Kanefusa Kato：“神经系统中低分子量分子伴侣的应激反应。”医学史（神经细胞死亡的控制）特刊255-260（1998）。

Matsuno,H.,et al.: "A heat shock-related protein,p20,plays an inhibitory role in platelet activation." FEBS Lett.429. 327-329 (1998)

Matsuno, H., et al.：“热休克相关蛋白 p20 在血小板活化中发挥抑制作用。”

Ito,H.,et al.: "Enhancement of expression of stress proteins by agents that lower the levels of glutathione in cells." Biochim.Biophys.Acta. 1397. 223-230 (1998)

Ito, H., et al.：“通过降低细胞中谷胱甘肽水平的药物来增强应激蛋白的表达。”

Kato K.,et al.: "Stimulation of the stress-induced expression of stress proteins by curcumin in cultured celld and in rat tissues in vivo." Cell Stress & Chap.3. 152-160 (1998)

Kato K. 等人：“姜黄素在培养细胞和大鼠体内组织中刺激应激诱导的应激蛋白表达。”