神経障害時の低分子量分子シャペロンの応答と生理的意義

低分子量分子伴侣在神经系统疾病过程中的反应和生理意义

• 批准号: 10176239
• 负责人: 加藤 兼房
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Institute for Developmental Research, Aichi Human Service Center
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10176239/
• 关键词: ストレス応答; 分子シャペロン; アニソマイシン; p38MAPキナーゼ; リン酸化; クリスタリン; 分裂細胞; hsp27

(1) 熱ストレス(43℃/30分)に対するC6ラットグリオーマ細胞中のhsp27とαBクリスタリンの合成誘導は、ストレス負荷後に0.1-0.3μg/mlのアニソマイシン(AMC)を2時間作用させると、著しく促進されることを見つけた。この際HSFのDNA結合能は変わらなく、hsp70の合成は促進されなかった。p38MAPキナーゼの阻害剤であるSB202190を共存させるとAMCの促進作用が抑制されることから、hsp27とαBクリスタリンのストレス応答機構にはp38MAPキナーゼカスケードが関与していることが示唆される。(2) αBクリスタリンの三ヵ所のリン酸化部位(Ser 19,Ser 45,Ser 59)のリン酸化をそれぞれ認識する特異抗体を使って以下の事実を明らかにした。(1)蛍光抗体染色で、分裂期の細胞では細胞種を問わすSer 45のリン酸化が高進していることを明らかにした。(2)分裂期の細胞を集め、細胞抽出液をIEFあるいはSDS-PAGE後に上記の抗体を用いてウエスタンブロットを行い、Ser 45のみならずSer 19のリン酸化も分裂細胞で高進しているのに対し、Ser59のリン酸化は逆に抑制されていることを見つけた。(3)αBクリスタリンの三ヵ所のセリン残基それぞれをリン酸化する活性を測定する方法を開発し、これを用いて分裂期の細胞ではSer 45 kinaseとSer 19 kinaseの活性が高進し、Ser 59 kinase活性が抑制されていることを明らかにした。(4)U373MGヒトグリオーマ細胞の抽出液を、DEAEカラムおよびSuperdex 200カラムにかけて、Ser 45 kinaseとSer 59 kinase活性を部分精製し、Ser 45 kinaseはp44/42 MAP kinaseであり、Ser 59 kinaseはMAPKAP kinase-2であることを明らかにした。

(1) thermal ス ト レ ス (43 ℃ / 30) に す seaborne る C6 ラ ッ ト グ リ オ ー マ cells の hsp27 と alpha B ク リ ス タ リ ン の synthesis induction は, ス ト レ ス load after 0.1 0.3 mu g/ml の に ア ニ ソ マ イ シ ン (AMC) を 2 time role さ せ る と, the し く promote さ れ る こ と を see つ け た. The <s:1> <s:1> interband HSF <s:1> DNA binding energy <s:1> changes わらなく, and hsp70 <s:1> synthesis <s:1> promotes されな った った った. P38MAP キ ナ ー ゼ の resistance against tonic で あ る SB202190 を coexistence さ せ る と AMC の promotes が inhibit さ れ る こ と か ら, hsp27 と alpha B ク リ ス タ リ ン の ス ト レ ス 応 answer institutions に は p38MAP キ ナ ー ゼ カ ス ケ ー ド が masato and し て い る こ と が in stopping さ れ る. (2) the alpha B ク リ ス タ リ ン の three ヵ の リ ン acidification site (Ser 19, Ser 45, Ser 59) の リ ン acidification を そ れ ぞ れ know す る specific antibody を っ て の below matter be を Ming ら か に し た. (1) antibody staining で 蛍 light, divide の cells で は cells of を asked わ す Ser 45 の リ ン acidification が high into し て い る こ と を Ming ら か に し た. (2) divide を set め の cell, extract focusing を IEF あ る い は に written after sds-page を の antibody with い て ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ ト を い, Ser 45 の み な ら ず Ser 19 の リ ン acidification も splinter cell で high into し て い る の に し, seaborne Ser59 の リ ン acidification は inverse に inhibit さ れ て い る こ と を see つ け た. (3) alpha B ク リ ス タ リ ン の three ヵ の セ リ ン residues そ れ ぞ れ を リ ン acidification す る determination of active を す る method を open 発 し, こ れ を with い て divide の cells で は Ser 45 kinase と Ser 19 kinase の high active が into し, Ser 59 kinase activity が inhibits されて る る とを とを and ら に に た. (4)U373MGヒトグリ ヒトグリ ヒトグリ ヒトグリ を を cell <s:1> extract を, DEAEカラムおよびSuperdex 200カラムに けて けて, Ser 45 kinaseとSer 59 kinase activity を partially refined <s:1>, Ser 45 kinase p44/42 MAP Kinase で あ り, Ser 59 kinase は MAPKAP kinase - 2 で あ る こ と を Ming ら か に し た.

项目成果

Kato,K.,et al.: "Phosphorylation of αB-crystallin in mitotic cells and identification of enzymatic activities responsible for phosphorylation." J.Biol.Chem.273. 28346-28354 (1998)

Kato, K., 等人：“有丝分裂细胞中 αB-晶状体蛋白的磷酸化和磷酸化酶活性的鉴定。J.Biol.Chem.273 (1998)。

加藤兼房: "神経系における低分子量分子シャペロンのストレス応答." 医学のあゆみ(神経細胞死制御). 別冊. 255-260 (1998)

Kanefusa Kato：“神经系统中低分子量分子伴侣的应激反应。”医学史（神经细胞死亡的控制）特刊255-260（1998）。

Matsuno,H.,et al.: "A heat shock-related protein,p20,plays an inhibitory role in platelet activation." FEBS Lett.429. 327-329 (1998)

Matsuno, H., et al.：“热休克相关蛋白 p20 在血小板活化中发挥抑制作用。”

Ito,H.,et al.: "Enhancement of expression of stress proteins by agents that lower the levels of glutathione in cells." Biochim.Biophys.Acta. 1397. 223-230 (1998)

Ito, H., et al.：“通过降低细胞中谷胱甘肽水平的药物来增强应激蛋白的表达。”

Kato K.,et al.: "Stimulation of the stress-induced expression of stress proteins by curcumin in cultured celld and in rat tissues in vivo." Cell Stress & Chap.3. 152-160 (1998)

Kato K. 等人：“姜黄素在培养细胞和大鼠体内组织中刺激应激诱导的应激蛋白表达。”