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神経障害時の低分子量分子シャペロンの応答と生理的意義

低分子量分子伴侣在神经系统疾病过程中的反应和生理意义

基本信息

批准号：
10176239
负责人：
加藤兼房
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Institute for Developmental Research, Aichi Human Service Center
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

(1) 熱ストレス(43℃/30分)に対するC6ラットグリオーマ細胞中のhsp27とαBクリスタリンの合成誘導は、ストレス負荷後に0.1-0.3μg/mlのアニソマイシン(AMC)を2時間作用させると、著しく促進されることを見つけた。この際HSFのDNA結合能は変わらなく、hsp70の合成は促進されなかった。p38MAPキナーゼの阻害剤であるSB202190を共存させるとAMCの促進作用が抑制されることから、hsp27とαBクリスタリンのストレス応答機構にはp38MAPキナーゼカスケードが関与していることが示唆される。(2) αBクリスタリンの三ヵ所のリン酸化部位(Ser 19,Ser 45,Ser 59)のリン酸化をそれぞれ認識する特異抗体を使って以下の事実を明らかにした。(1)蛍光抗体染色で、分裂期の細胞では細胞種を問わすSer 45のリン酸化が高進していることを明らかにした。(2)分裂期の細胞を集め、細胞抽出液をIEFあるいはSDS-PAGE後に上記の抗体を用いてウエスタンブロットを行い、Ser 45のみならずSer 19のリン酸化も分裂細胞で高進しているのに対し、Ser59のリン酸化は逆に抑制されていることを見つけた。(3)αBクリスタリンの三ヵ所のセリン残基それぞれをリン酸化する活性を測定する方法を開発し、これを用いて分裂期の細胞ではSer 45 kinaseとSer 19 kinaseの活性が高進し、Ser 59 kinase活性が抑制されていることを明らかにした。(4)U373MGヒトグリオーマ細胞の抽出液を、DEAEカラムおよびSuperdex 200カラムにかけて、Ser 45 kinaseとSer 59 kinase活性を部分精製し、Ser 45 kinaseはp44/42 MAP kinaseであり、Ser 59 kinaseはMAPKAP kinase-2であることを明らかにした。

(1)Heat treatment (43℃/30 min) induced synthesis of hsp27 and αB in C6 cells, and 0.1-0.3μg/ml of AMC after heat treatment (2 min). HSF DNA binding activity is promoted by HSP70 synthesis. p38 MAP (2)The following events are described in detail for the recognition of the amino acid residues (Ser 19,Ser 45,Ser 59) of αB. (1)Light antibody staining, mitotic cells, cell species, Ser 45, and high levels of acidification (2)Cell collection at division stage, cell extract, IEF, SDS-PAGE, antibody, Ser 45, Ser 19, Ser59, Ser59, S (3)A method for determining the activity of Ser 45 kinase and Ser 19 kinase in cells at mitotic stage was developed. The activity of Ser 59 kinase was inhibited. (4) The extract from U373MG cells is detected in DEAE and Superdex 200 karanums, and the activities of Ser 45 kinase and Ser 59 kinase are partially refined. Ser 45 kinase and p44/42 MAP kinase are detected, and Ser 59 kinase and MAPKAP kinase-2 are detected.