神経障害時の低分子量分子シャペロンの応答と生理的意義

低分子量分子伴侣在神经系统疾病过程中的反应和生理意义

基本信息

批准号：
09280240
负责人：
加藤兼房
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Institute for Developmental Research, Aichi Human Service Center
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

カイニン酸誘導痙攣発作ラットにおけるストレス蛋白質の応答を解析し、以下の結果を得た。1)カイニン酸投与後48-96時間で極大値(1.5-2μg/mg protein)を示す30-50倍の顕著なhsp27の誘導が、海馬と内嗅皮質で観察された。また、mRNAレベルも顕著に増加していた。10日後でも数百ng/mg proteinの高いレベルであった。嗅球でも軽度のhsp27の誘導が認められたが、小脳では応答がなかった。2)2種類のカルシウム結合蛋白質、28-kDa calbindin-Dとparvalbumin、が小脳では海馬の10倍以上存在し、これが小脳への障害を防いでいることが示唆された。3)αBクリスタリンも数倍の濃度に上昇していたが、極大値でも50ng/mg protein以下の低濃度であった。一方hsp70も増加していたが、濃度は低くかった。hsc70のレベルは増加していなかった。4)hsp27抗体を用いた免疫組織化学では、海馬、視床、梨状葉皮質、内嗅皮質、脳梁のグリア細胞およびニューロンが強く染色された。正常対照ラットでは、海馬錐体細胞など神経細胞が染色され、グリア細胞はほとんど染色されなかった。以上の結果より、hsp27の顕著な発現誘導はカイニン酸誘導発作後に傷害された組織のグリア細胞で認められ、障害組織の修復に関与していることが推測された。ヒトグリオーマ細胞U373 MGを用いてαBクリスタリンのリン酸化について解析し、以下の結果を得た。1)αBクリスタリンもhsp27と同様、種々のストレスによって、最高三カ所のセリン残基がリン酸化され、その位置はSer19,Ser45とSer59である。2)αBクリスタリンはp38とp44/42 MAPキナーゼカスケードが関与する酵素によってリン酸化される。3)特異抗体を使った解析で、細胞分裂期にはSer45とSer19のリン酸化が特異的・普遍的に高進していることを発見した。

分析了胁迫蛋白在海藻酸诱导的癫痫发作大鼠中的反应，并获得了以下结果。 1）在海马和内hinal骨皮层中观察到了30-50倍的HSP27的显着诱导，在海藻酸给药后48-96小时显示最大值（1.5-2μg/mg蛋白）。 mRNA水平也显着增加。即使在10天后，该水平仍处于数百ng/mg蛋白的高水平。嗅球也显示出HSP27的温和诱导，但在小脑中未发现反应。 2）两种类型的钙结合蛋白，28-kDa calbindin-d和parvalbumin在小脑中存在的10倍以上是海马的10倍以上，这表明这可以防止小脑损害。 3）尽管αB晶体的浓度也增加到几次，但浓度低，最大值为50 ng/mg蛋白或更少。同时，HSP70也增加了，但浓度较低。 HSC70水平没有增加。 4）使用HSP27抗体在海马，丘脑，梨状叶皮层，内嗅皮层和callosum中强烈染色的神经胶质细胞和神经元进行免疫组织化学。在正常对照大鼠中，神经元（如海马锥体细胞）被染色，几乎不会染色。从上述结果中，可以推测出在海藻酸引起的癫痫发作后受伤的组织中观察到Hsp27表达的显着诱导，并参与了受损组织的修复。使用人神经胶质瘤细胞U373 mg分析αb晶体的磷酸化，并获得以下结果。 1）像Hsp27一样，αB晶体蛋白在最多三个丝氨酸残基上通过各种应力磷酸化，其位置Ser19，Ser45和Ser59。 2）αB晶体磷酸化是由参与p38和p44/42 MAP激酶级联反应的酶磷酸化的。 3）使用特异性抗体的分析表明，在细胞分裂阶段，Ser45和Ser19的磷酸化特别且普遍增加。