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脳の老化に伴って脳に沈着する分子シャペロンの生理的・病理的意義

随着大脑老化，分子伴侣沉积在大脑中的生理和病理意义

基本信息

批准号：
12210166
负责人：
加藤兼房
金额：
--
依托单位：
Institute for Developmental Research, Aichi Human Service Center
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

平成12年度の研究成果を以下に列挙する1)αBクリスタリンもHsp27と同様に、リン酸化を受けると重合状態に変化が起こり、解離することを明らかにした。また、リン酸化され、解離状態のαBクリスタリンは分子シャペロンとしての活性が低下することを、リン酸化部位のセリン残基をアスパラギン酸に置換した変異蛋白質を発現させた細胞レベル、および変異蛋白質を大腸菌で作製し、in vitroで証明した。2)アレキサンダー病2症例(乳幼児型と若年型核一例)の大脳皮質について、αBクリスタリンおよびそのリン酸化部位に対する抗体、抗Hsp27抗体を用いて、ウエスタンブロット法および免疫組織染色法にて解析した。アレキサンダー病脳ではαBクリスタリンおよびHsp27がローゼンタル線維の構成成分として多量に、不溶性分画で検出された。Ser-59のリン酸化されたαBクリスタリンが検出された。一方、アルツハイマー病脳および加齢者脳でもαBクリスタリンおよびHsp27が不溶性分画に蓄積していて、αBクリスタリンのリン酸化はおもにSer-59であった。すなわち、αBクリスタリンおよびHsp27は脳の老化に伴って、脳内に沈着することが示唆された。ラット脳でも、加齢に伴ってαBクリスタリンが増量することを明らかにした。3)尾部懸垂により誘発させた廃用萎縮ラットヒラメ筋では、αBクリスタリンのSer-59のリン酸化が特異的に高進し、特に筋肉ホモジェネートの不溶性分画で顕著であることを明らかにした。すなわち、αBクリスタリン、とくにそのリン酸化型が筋細胞内の蛋白質品質管理に関与していることが示唆された。4)U373MGヒトグリオーマ細胞の培養液にプロテアゾーム阻害剤を添加して培養を継続すると、数時間内にαBクリスタリンが不溶性分画に増量しはじめ、Ser-59のリン酸化型が著しく増加すること、細胞をSer-59のリン酸化を認識する抗体で蛍光染色すると、核周辺に濃縮されたいわゆるaggresomeが形成され、リン酸化型αBクリスタリンが、その構成成分の一つであることを見つけた。この結果もαBクリスタリンが細胞内の蛋白質の品質管理に関与していることを示唆している。

The research results of FY2012 are as follows: 1) αBククリスタリンもHsp27 and the same様に, リン acidification をacceptance けると overlap state に変化がrise こり, dissociation することを明らかにした.また, リンacidified され, dissociated state のαBクリスタリンはmolecule シャペロンとしてのactivity がlowered することを, リンacidified site のThe セリン residue をアスパラギン acid に substitution した変isoprotein を発appears させたcell レベル, および変isoprotein を coliform でし, in It is proven in vitro. 2) 2 cases of アレキサンダー disease (one case of puerperal type and one case of juvenile type) の大脳Cortical について, αBクリスタリンおよびそのリンThe acidified site antibody and the anti-Hsp27 antibody were analyzed using the immunohistochemical staining method and the immunohistochemistry method.アレキサンダー disease 脳ではαBクリスタリンおよびHsp27がローThe composition of the ゼンタル line dimension is the large amount of として, and the insoluble part is the で検出された. Ser-59のリンされたαBクリスタリンが検出された. One party, アルツハイマー disease 脳および加颢者脳でもαBクリスタリンおよびHsp27がNo Soluble separation and accumulation, αBクリスタリンのリン acidification, Ser-59であった.すなわち, αBクリスタリンおよびHsp27 は脳のaging に companion って, 脳内に综合することが时攆された.ラット脳でも、加齢に合ってαBクリスタリンが Increase the amount of することを明らかにした. 3) The tail hanging tail is used to induce shrinkage and shrinkage, and αB クリスタリンのSer-59のリAcidification is a special high-intensity, special muscle and meat ホモジェネートの insoluble draw and a であることを明らかにした.すなわち, αBククリスタリン, とくにそのリン acidified が muscle intracellular protein quality control and していることが时攆された. 4) U373MG ヒトグリオーマcell culture medium にプロテアゾーム blocking agent added して culture を継続すると, number Time にαB クリスタリンが insoluble separation に Increase amount しはじめ, Ser-59 のリン acidified type がしく Increase すること, cell をSer-59 acidification を recognition する antibody で蛍 light stain すると, perinuclear 辺に concentration されたいわゆるag Gresome is formed by され, リン acidified αBクリスタリンが, and その constitutes の一つであることを见つけた.このRESULTS もαBクリスタリンが intracellular protein のquality control and していることをshows instigation している.