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新しいホスホリパーゼDのクローニングと新機能の探索

新型磷脂酶D的克隆及新功能的探索

基本信息

批准号：
10212201
负责人：
立井一明
金额：
$ 19.58万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (B)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10212201/
关键词：
ホスホリパーゼD ホスファチジン酸複眼形成ショウジョウバエリパーゼ脂質胚発生リゾホスホリパーゼリゾリン脂質クローニングアシルトランスフェラーゼエステラーゼアシル蛋白チオエステラーゼ NO合成酵素ロイシンジッパーアンキリンリピートアスパラギナーゼ

项目摘要

ホスホリパーゼD(PLD)は種々のアゴニスト刺激により活性化され、ホスファチジルコリンから脂質性シグナル分子、ホスファチジン酸を生成する。我々はPLDの生体内における機能を個体レベルで検討する目的でショウジョウバエよりPLDを単離し発生過程における関与について検討した。ショウジョウバエの初期胚ではPLDのmRNAは産卵直後から多核性胞胚期において蓄積していたが、細胞性胞胚期、嚢胚期前期には検出されなかった。また、PLD活性については幼虫、蛹、成虫で活性が検出されたが、産卵後6-9時間の胚発生初期にPLD活性の検出されない時期があった。これらの事から、胚発生の一時期にPLD活性が低下することが重要である可能性が示唆された。ショウジョウバエPLDは低分子量Gタンパク質のARF(ADP ribosylation factor)による活性化が中程度の感受性を示すことや、ショウジョウバエPLDと緑色蛍光タンパク質(Green Fluorescent Protein、GFP)との融合タンパク質が膜に局在することからショウジョウバエPLDタンパク質は哺乳動物のPLD2型であることが示された。ショウジョウバエPLDの生体内での機能を探る目的で、形質転換動物での強制発現実験を行った。ショウジョウバエPLDを3令幼虫の眼の成虫原基で発現させて成虫の複眼の形成に及ぼす効果について検討したところ、個眼の形態に異常が見られ複眼の規則正しい構造が乱れた。このことはショウジョウバエPLDの過剰発現によって複眼の細胞の分化決定に影響を及ぼすことを示唆している。本研究によってショウジョウバエPLDが発生過程でも重要な機能を果たしている可能性が明らかになった。

The protein D(PLD) is a protein that stimulates the production of lipid molecules and fatty acids. The function of PLD in vivo is discussed in detail in the process of PLD development. PLD mRNA was accumulated in the early embryo stage, cellular embryo stage and early embryo stage. PLD activity was detected in larvae, pupae and adults, and in early embryo development 6-9 days after oviposition. The possibility that PLD activity is low during the development of the embryo is also important. The sensitivity of PLD to ARF(ADP ribosylation factor), a low molecular weight Protein, to PLD and Green Fluorescent Protein (GFP) fusion protein, is shown in the membrane of PLD type 2 in mammals. To explore the function of PLD in vivo, the stress development of morphologically transformed animals was carried out. The development of the primordium of the adult eye of the larva, the formation of the compound eye of the adult and the abnormality of the morphology of the individual eye, the disorder of the regular structure of the compound eye, were observed. The expression of PLDs in the cell differentiation process was studied. This study aims to clarify the possibility of the development of PLD by examining its important functions.