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水晶体の透明性維持におけるリン酸化-脱リン酸化調節機構の関与-ホスホチロシンホスファターゼ活性を中心とする検討-

磷酸化-去磷酸化调节机制参与维持晶状体透明度 - 以磷酸酪氨酸磷酸酶活性为中心的研究 -

基本信息

批准号：
10877276
负责人：
梅田泉
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Teikyo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は鶏胚水晶体中のある種の酸性ホスファターゼがホスホチロシルプロテインホスファターゼ(PTPase)活性を持つことを以前に見い出した。この酵素が水晶体の細胞分化、細胞接着あるいはアポトーシス等の制御を介して水晶体の透明性を制御している可能性を想定し、本研究を進めた。1. 鶏胚水晶体中のPTPPaseの分離精製微量で不安定な酵素であるため、短時間でステップの少ない精製方法を検討した。分取用高性能ゲル濾過カラムと容量1mLの高性能陽イオン交換カラムで精製を行い、さらにSDS電気泳動を行うことより、ほぼ単一の蛋白質にまで精製することができた。2段階のカラム精製で比活性は520倍に上昇し、活性回収率は8.1%であった。2. 生化学的性質等の検討この酵素の分子量は約18kDaであり、ホスホチロシンやFMNに対する基質特異性が高く、バナジン酸やSH阻害剤、PAOにより強い活性阻害を受けた。ペプチドや蛋白質のチロシン残基に結合するリン酸基を特異的に加水分解することも確認できた。これらの性質は、最近性質が明らかにされつつある低分子型PTPPaseに類似し、この範疇に属するものと思われる。3. 他組織、他動物での検討鶏胚水晶体の酸性ホスファターゼ活性の大半はこの酵素であることを明らかにした。それに比べ、高い酸性ホスファターゼ活性を有する肝臓や脳では、この酵素が占める比率はわずかであった。また鶏胚のみでなくウシ、ウサギおよびマウス水晶体中にもこの酵素の存在を確認した。4. アミノ酸一次構造解析精製標品を用いて部分一次構造の決定を試みたが、N末端がブロックされており、現時点では成功していない。今後デブロッキング等を行って再試行の予定である。5. 機能解析現時点ではこの酵素の水晶体での機能の解析には至らなかったが、この酵素に対するモノクローナル抗体を現在作成中であり、機能解析の大きな武器になるものと期待している。

The acidic acidic acidic acidic acidic crystals in my crystal The activity of PTPase is the same as before.このEnzyme がcrystal のcell differentiation, cell adhesion あるいはアポトーシス, etc. のcontrol をmediated してcrystal のtransparency をcontrol している possibility をscenario し, this study is progressing. 1. Isolation and purification of PTPPase in embryonic crystals, using the method of purifying trace amounts of unstable enzyme and short-term PTPPase. For dispensing, high-performance ゲル filtered カラムと capacity 1mL high-performance positive イオン exchange カラムで refined を行い,さらにSDS electrophoresis を行うことより, ほぼ単一のprotein にまでRefined することができた. The specific activity of the 2-stage のカラム purification is increased by 520 times, and the activity recovery rate is 8.1%. 2. Discussion of biochemical properties, etc. The molecular weight of the enzyme is about 18kDa. Specificity is high, バナジン acid is SH blocking agent, PAO is strong and active blocking agent is accepted. It is a hydrolyzable protein residue that binds to an acidic group and is specifically hydrolyzed. The properties of これらのは, the recent properties of が明らかにされつつあるlow molecular type PTPPase are similar, and the category of このcategories are するものと思われる. 3. Other tissues and other animals can use acidic enzymes in crystalline embryos and active enzymes. High acidity ratio, high acidic activity ratio, liver enzyme activity ratio, and high enzyme activity ratio. The presence of にもこのzyme in また鶏 embryo and ウサギおよびマウス crystals has been confirmed. 4. Analysis of the primary structure of aminic acid. The purified standard product uses the primary structure of the いて part to determine the trial みたが, the N-terminal がブロックされており, and the current point では success していない. From now on, we will wait for the implementation of the program and try it out again. 5. Functional analysis Analysis of the function of crystal crystal of enzyme at present point The クローナルantibodyを is currently produced as a medium-sized weapon, and the functional analysis of the large weapon になるものとawaited している.