赤血球分化に関与するシグナル伝達分子の探索と機能解析

红系分化相关信号分子的搜寻及功能分析

• 批准号: 10878131
• 负责人: 吉村 昭彦
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10878131/
• 关键词: JAK; STAT; CIS; エリスポエチン; インターフェロン; シグナル伝達; チロシンキナーゼ; 細胞分化

我々は赤芽球様細胞ELM-1を用いてエリスロポエチン(EPO)による赤血球分化の研究を行っている。我々はEGF受容体とEPO受容体のキメラ分子を作成し、さら受容体のチロシン残基に変異を導入することで受容体細胞内ドメインの2つのチロシン残基(Y343、Y401)のいずれかが赤血球分化に必須であることを証明した。これら2つのチロシン残基はSTAT5の活性化に必要であり、STAT5と分化は密接に関連していることが考えられた。しかしながら一方IL3受容体やプロラクチン受容体とのキメラを作成して本細胞に導入したところこれらのキメラ分子はSTAT5を活性化するもののこの細胞の赤血球分化は誘導しないことを明らかにした。したがってIL3受容体になくEPO受容体に特異的な分化シグナルが存在し、STAT5とともに分化の促進に働くと考えられる。そしてそのシグナルの発生にはEPO受容体のY343、Y401のいずれかのりん酸化が必要であることが示唆される。この2つのりん酸化チロシン残基と会合する分子をクローニングするためりん酸化ペプチドによる精製を行った。アミノ酸配列決定の結果これらのペプチドにSTAT5とポスフォリパーゼCγ-2(PLC-γ-2)が会合することを明らかにした。PLC-γ-2の赤血球分化における役割を明らかにするために現在阻害剤やドミナントネガティブフォームを導入する実験を行っている。さらに酵母two-hybrid法による組織的スクリーニングを行うために、JAK2チロシンキナーゼを共発現させたスクリーニング系を開発した。これにエリスロポエチン受容体細胞ドメインをbaitとして様々なライブラリーをスクリーニングしたころフォスファチジル酸キナーゼのp55サブユニットなどが同定できた。新規分子も多数あり現在解析中である。

We have conducted research on erythroid differentiation using erythroid bud cell ELM-1. We have demonstrated that the two residues (Y343, Y401) of EGF receptor and EPO receptor are essential for erythroid differentiation. The 2 residues are necessary for STAT5 activation, and STAT5 differentiation is closely related. It is now clear that when one IL3 receptor and one macrophage receptor are made and these macrophage molecules are introduced into the cells to activate STAT5, the erythroid differentiation of these cells is induced. IL-3 receptor specific differentiation exists, STAT-5 receptor specific differentiation promotes It is necessary for EPO receptor Y343 and Y401 to be acidified during the development of EPO receptor. 2. Refinement of residues and molecules The results of the acid allocation determination were as follows: STAT5: Cγ-2: Cγ-2: C PLC-γ-2 erythrocytes differentiation process is the process of inhibiting the production of erythrocytes. The yeast two-hybrid method is used to develop the yeast system. The content of the receiver cell was determined by the baits. The new regulation molecule majority now analyzes in.

项目成果

Wakioka T,et al.: "APS,an Adaptor Protein Containing PH and SH2 Domains Inhibits the JAK-STAT Pathway in Collaboration with c-Cbl." Leukemia. (in press). (1999)

Wakioka T 等人：“APS，一种含有 PH 和 SH2 结构域的接头蛋白，与 c-Cbl 合作抑制 JAK-STAT 通路。”