赤血球産生を制御するシグナル伝達分子の探索と機能解析

控制红细胞生成的信号分子的搜索和功能分析

• 批准号: 11878142
• 负责人: 吉村 昭彦
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11878142/
• 关键词: チロシンキナーゼ; JAK; STAT; エリスロポエチン; ノックアウトマウス; c-kit; SH2; PH

赤血球造血の制御機構を解明するために我々は造血幹細胞に特異的に発現する遺伝子の解析を行った。まず骨髄細胞をセルソーターにて造血幹細胞を分画し、この細胞集団からPCR増幅を経てcDNAライブラリーを作成した。これを酵母two-hybrid用のベクターに組み込み、c-kitをbaitとしたスクリーニングを行った。その結果STAP-1と呼ぶ新規遺伝子をクローニングした。この遺伝子はPleckstrin homology(PH)ドメイン,Src homology2(SH2)ドメインを有するアダプター分子でc-kitによってチロシンりん酸化された。RT-PCRの結果、STAP-1の発現はc-kitを有する骨髄細胞に限局することが明かとなった。また最も高い発現はCD34low/-Sca-1+c-kit+Lin-の幹細胞分画に得られた。現在生化学的な解析を行っている。次にエリスロポエチン受容体からのシグナルを制御する分子として、我々がクローニングしたCIS3の機能解析を行った。CIS3は胎児肝臓の赤芽球前駆細胞に強く発現していた。生理機能を明かにするためにノックアウトマウスを作成した。CIS3-/-ノックアウアトは胎性致死であり、受精後12日以前は野生型と大きな形態の差はないが12.5-15日胚では全身での出血が見られた。また特に肝臓では構造が崩れており有核の胎児型赤血球で充満していた。胎児肝細胞をEPO存在下で培養すると野生型マウスにくらべてはるかに大きなBFU-E(前期赤芽球前駆細胞)コロニーが形成された。また赤芽球前駆細胞においてCIS3とJAK2の会合が確かめられた。したがってCIS3は胎児造血幹細胞においてEPO/JAK2シグナルを負に調節する因子であることが示された。

Red blood cell system of hematopoietic の imperial institutions を interpret す る た め に I 々 は hematopoietic stem cells に specific に 発 now す る heritage 伝 son の parsing line を っ た. ま ず bone marrow cells を セ ル ソ ー タ ー に て hematopoietic stem cells を painting し, こ の cells sets 団 か ら PCR rights of を 経 て cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を made し た. こ れ を yeast two hybrid - use の ベ ク タ ー に group み 込 み, c - kit を bait と し た ス ク リ ー ニ ン グ を line っ た. そ の results と shout ぶ STAP - 1 new rules but 伝 son を ク ロ ー ニ ン グ し た. こ の posthumous son 伝 は Pleckstrin homology (PH) ド メ イ ン, Src homology2 (SH2) ド メ イ ン を have す る ア ダ プ タ ー molecular で c - kit に よ っ て チ ロ シ ン り さ ん acidification れ た. The RT-PCR assay results and STAP-1 assay showed that <s:1> c-kitを had する bone marrow cell に limitation する となった とが とが and となった となった. Youdaoplaceholder0 the most <s:1> high また occurrence of CD34low/ -sca-1 +c-kit+Lin- <s:1> stem cell subdivision に to られた. Now the な analysis of biochemistry を line って る る. Time に エ リ ス ロ ポ エ チ ン by let body か ら の シ グ ナ ル を suppression す る molecular と し て, I 々 が ク ロ ー ニ ン グ し た CIS3 の line function analytical を っ た. CIS3 indicates that the 駆 cells in front of the red bud in the 児 liver of the fetus are に strongly く present, and there is a <s:1> て た た た た. Physiological functions を にするためにノッ にするためにノッ アウト アウト ウスを ウスを are made into た. CIS3 - / - ノ ッ ク ア ウ ア ト は fetal death で あ り は before and after fertilization 12, wild type と big き な form poor の は な い が 12.5-15 embryo で は systemic で の bleeding が see ら れ た. ま た に liver especially viscera で が は structure collapse れ て お nuclear り の tire type where red blood cell で charge against し て い た. Tire where the presence of liver cell を EPO で cultivate す る と wild-type マ ウ ス に く ら べ て は る か に big き な BFU E (previous red gemmule 駆 cells) before コ ロ ニ ー が form さ れ た. Youdaoplaceholder0 pre-maltival 駆 cells にお て てCIS3とJAK2 <s:1> rendezvous が exact められた められた. し た が っ て CIS3 は tire where hematopoietic stem cells に お い て EPO/JAK2 シ グ ナ ル を negative に adjust す る factor で あ る こ と が shown さ れ た.

项目成果

Matsumoto A,et al.: "Suppression STAT5 Functions in Liver,Mammary Glands,and T Cells in Cytokine-Inducible SH2-Containing Protein 1 Transgenic Mice."Mol.Cell.Biol.. 19・9. 6396-6407 (1999)

Matsumoto A 等人：“抑制 STAT5 在细胞因子诱导的 SH2 含有蛋白转基因小鼠的肝脏、乳腺和 T 细胞中的功能”。Mol.Cell.Biol. 19・9 (1999)。

Marine JC,et al.: "SOCS3 Is Essential in the Regulation of Fetal Liver Erythropoiesis."Cell. 98・5. 617-627 (1999)

Marine JC 等人：“SOCS3 在胎儿肝脏红细胞生成的调节中至关重要”。细胞 98・5（1999）。

Yasukawa H, et al.: "The JAK-Binding Protein JAB Inhibits Janus Tyrosine Kinase Activity Through Binding in the Activation Loop."EMBO J.. 18, 5. 1309-1320 (1999)

Yasukawa H 等人：“JAK 结合蛋白 JAB 通过与激活环中的结合抑制 Janus 酪氨酸激酶活性。”EMBO J.. 18, 5. 1309-1320 (1999)

Yokouchi M,et al.: "APS,and adaptor protein containing PH and SH2 domains,is associated with the PDGF receptor and c-Cb1,and inhibits PDGF-induced mitogenesis"Oncogene. 18・3. 759-767 (1999)

Yokouchi M 等人：“APS 和含有 PH 和 SH2 结构域的接头蛋白与 PDGF 受体和 c-Cb1 相关，并抑制 PDGF 诱导的有丝分裂”Oncogene 18·3 (1999)。

Masuhara M,et al.: "Molecular cloning of murine STAP-1,the stem cell-specific adaptor protein containing PH and SH2 domains."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 268・3. 679-703 (2000)

Masuhara M, et al.：“鼠 STAP-1 的分子克隆，含有 PH 和 SH2 结构域的干细胞特异性接头蛋白。”Biochem.Biophys.Res.Commun. 268・3 (2000)。