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極限微生物に由来する多糖分解酵素の構造―活性相関と糖鎖認識機構

極限微生物に由来する多糖分解酵素の構造―活性相関と糖鎖認識機構
极端微生物多糖降解酶的构效关系及糖链识别机制
批准号：
11121211
负责人：
中村 聡
金额：
$1.02万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1999 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11121211/
关键词：
キシラナーゼタンパク質工学進化分子工学触媒ドメイン反応至適pHキシラン結合ドメインファージディスプレイ糖鎖認識

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项目成果

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好アルカリ性バシラス属細菌41M-1株キシラナーゼは触媒ドメインとキシラン結合ドメイン(XBD)から構成される.41M-1株キシラナーゼの触媒ドメインについて,タンパク質工学的検討を行った.Asn44を酸性アミノ酸Aspに置換したところ,反応の至適がアルカリ性(pH9.0)からが中性(pH6.0)へとシフトすることがわかった.次に,進化分子工学によるXBDの機能変換を試みた.ファージベクターfNE2を用い,繊維状ファージの外殻タンパク質gIIIpのアミノ末端に相当する位置に41M-1株キシラナーゼ遺伝子XBD領域を連結した.この組換えファージDNAを導入した大腸菌より調製した組換えファージは不溶性キシランヘの高い結合能を有しており,XBDがファージ表面に正しくディスプレイされていることが示された.Error-prone PCRによりXBD遺伝子にランダム変異導入を行った.変異導入後のXBD遺伝子をfNE2に挿入した後,大腸菌に導入し,約20,000株の変異体を含むファージライブラリーを作製した.ファージライブラリー溶液を不溶性キシラン充てんカラムに通し,流出した画分を回収して大腸菌に再感染させた.感染後の大腸菌からファージ粒子を調製し,上の操作を繰り返すことにより,不溶性キシラン結合能が野生型XBDの1/1,000以下に低下した変異体10株を選抜した.得られた変異型XBD遺伝子の塩基配列解析により,XBD中のW317およびF284が不溶性キシランヘの結合に重要な役割を果たしていることが明らかとなった.
期刊论文(8)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
S. Nakamura et al.: "A Novel Bacteriorhodopsin-like Protein from Haloarcula japonica Strain Tr-1 : Gene Cloning, Sequencing and Transcription Analysis"Extremophiles. (印刷中). (2000)
S. Nakamura 等人：“来自 Haloarcula japonica 菌株 Tr-1 的新型细菌视紫红质样蛋白：基因克隆、测序和转录分析”（出版中）。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
S. Nakamura et al.: "Purification and Characterization of a Ferredoxin from Haloarcula japonica Strain TR-1"BioMetals. (印刷中). (2000)
S. Nakamura 等人：“来自 Haloarcula japonica Strain TR-1 的铁氧还蛋白的纯化和表征”BioMetals（出版中）。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
S. Nakamura et al.: "Molecular Cloning of A1-ATPase Gene from Extremely Halophilic Archaeon Haloarcula japonica Strain TR-1"Necleic Acids Symp. Ser.. 42. 75-76 (1999)
S. Nakamura 等人：“来自极端嗜盐古菌 Haloarcula japonica 菌株 TR-1 的 A1-ATP 酶基因的分子克隆”Necleic Acids Symp。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
S. Nakamura et al.: "Secretionl Expression of Bacillus subtilis Xylanase Gene in the Basidiomycete Coprinus cinereus"FEMS Microbiol. Lett.. 178. 277-282 (1999)
S. Nakamura 等人：“枯草芽孢杆菌木聚糖酶基因在担子菌灰盖鬼伞中的分泌表达”FEMS Microbiol。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
共 8 条
    離散化された幾何学的フローの研究
    • 批准号：
      24K16917
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
    • 资助金额：
      $3.08万
    • 财政年份：
      2024
    • 负责人：
      中村 聡
    • 依托单位：
      Tokyo Institute of Technology
    ポリマーブラシによるコロイドナノ粒子の形状選択的分離法の開発
    • 批准号：
      24K17574
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
    • 资助金额：
      $2.16万
    • 财政年份：
      2024
    • 负责人：
      中村 聡
    • 依托单位：
      Hokkaido University
    膵・胆道癌の早期診断を目指したバイオマーカーの検索と臨床応用
    • 批准号：
      22K20826
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
    • 资助金额：
      $1.83万
    • 财政年份：
      2022
    • 负责人：
      中村 聡
    • 依托单位：
      Kyushu University
    標準的ケーラー計量の場の量子化を用いたファノ多様体の幾何構造の研究
    海外基金