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新しいIAPファミリー蛋白TIAPによる細胞死、細胞周期の制御機構解析

IAP家族新蛋白TIAP解析细胞死亡和细胞周期的调控机制

基本信息

批准号：
11139213
负责人：
幡野雅彦
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

IAP(Inhibitor of Apoptosis Protein)ファミリー蛋白はウイルスから哺乳類まで広く保存されており、アポトーシスの抑制に関与している。我々は新しいマウIAPファミリーの遺伝子TIAP(Thymus and tesis IAP)をクローニングした。アミノ酸配列より、ヒトsurvivinのホモログであると考えられる。その発現は胸腺と精巣に強く認められその他の臓器においても増殖のさかんな細胞に強く発現している。本年度の研究により以下のことを明らかにした。1.TIAPの細胞周期特異的な発現のメカニズムの解析: TIAP蛋白、mRNAともに培養細胞においては細胞周期のS-G2・M期にその発現が誘導される。また組織においても増殖の盛んな細胞において発現が認められる。TIAPの発現調節機構を知る目的でプロモーター領域の解析を行なった。Primer extension法、5′RACE法にて転写開始点を決定した(ATG翻訳開始点より100bp上流)。約1.2kbの5′flanking領域にはTATA boxはなく、AP2 site,NF-kB site,SP1 siteが存在した。また14箇所のCDE(Cell cycle dependent element)配列と1つのCHR(Cell cycle gene homology region)配列が認められた。CDEまたはCHRを欠失させたLuciferase asseyの結果よりTIAP遺伝子の5′UT内に隣接して存在するCDE,CHR配列が細胞周期特異的発現の制御に必須であることを明らかにした。2.T細胞分化、増殖、腫瘍化におけるTIAPの役割の解析: Lck promoterを用いて胸腺および脾臓においてTIAP蛋白が高発現しているトランスジェニックマウスを3ライン確立した(Lck-TIAP-Tg)。これらTgマウスのT細胞の分化についてFACSにて解析したが異常は認められなかった。またT細胞のアポトーシスを起こす各種刺激(serum starvation,anti-CD3,gulucocorticoid,radiation,anti-Fas)に対する感受性についてAnnexin Vを用いフローサイトメトリーによって解析したがコントロールと比較して明らかな差は認められなかった。一方胸腺細胞および脾臓T細胞を抗CD3抗体、PMA,Ionomycin,ConAなどの各種マイトジェンで刺激し、増殖反応を調べた。その結果TgマウスにおいてPMA+Ionomycinの刺激による増殖反応が増強していた。3.個体発生、分化におけるTIAPの機能解析: TIAPの生理的機能を調べる目的でTIAPノックアウトマウスの作製を行なった。現在キメラマウスを交配している。

IAP (Inhibitor of Apoptosis Protein), protein, protein and protein. I would like to know if you have a new IAP. Your child is TIAP (Thymus and tesis IAP), and you are in a bad mood. Please tell me that the acid configuration is not good enough, and that the survivin is not suitable for the test. You can see that the thymus is fine, so that you can see that the thymus is fine, and that the thymus is fine. This year, we will conduct a study on the following topics. Analysis of the specific cell cycle of 1.TIAP cells: TIAP protein, mRNA protein, cell cycle cycle, S-G2 ·M phase, cell cycle, cell cycle and cell cycle. The organization is responsible for the growth and growth of the plant, and the population is very high. TIAP has realized that the organization is aware of the purpose of analyzing the business operation in the field of management. Primer extension method, 5 'race method to determine the starting point of writing (ATG flip starting point to 100bp upstream). There are some problems in the field of 1.2kb and 5'flanking, such as TATA box, AP2 site,NF-kB site,SP1 site, etc. CDE (Cell cycle dependent element) of "14" is assigned to "1"CHR (Cell cycle gene homology region)". CDE failure CHR failure Luciferase assey results there is a connection in the TIAP sub-5'UT that requires that the CDE,CHR configuration has special cell cycle characteristics that must be verified. 2. T-cell differentiation, colonization, transformation, TIAP cut analysis: Lck promoter uses thymus, spleen, spleen, TIAP protein and high levels of protein to show that there is a high level of Lck-TIAP-Tg. The Tg, the T, the differentiation, the FACS, the analysis, the normal, the, the. All kinds of stimuli (serum starvation,anti-CD3,gulucocorticoid,radiation,anti-Fas), sensitivity, sensitivity One side of the thymus cell tested the spleen cell anti-CD3 antibody, PMA,Ionomycin,ConA tested all kinds of anti-thymus cells to stimulate the spleen cells, and the spleen cells were infected with anti-DNA antibodies. The results showed that Tg induced PMA+Ionomycin to stimulate colonization and strengthen the immune system. 3. The physiological function of TIAP: the physiological function of TIAP. The purpose of this study is to analyze the physiological function of TIAP. The purpose of this study is to analyze the physiological function of TIAP. Now, you have to mate with others.