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Ncxノックアウトマウスにおける巨大結腸症と神経細胞死

Ncx 基因敲除小鼠的巨结肠和神经元细胞死亡

基本信息

批准号：
09280206
负责人：
幡野雅彦
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09280206/
关键词：
Ncx ノックアウトマウス NID 腸管神経節神経細胞死 Caspase3

项目摘要

Ncxノックアウト(KO)マウスでは、生後3〜4週で巨大結腸症を示した。しかし従来のヒトHirschsprung病は腸管神経節の神経細胞が欠如しているのに対し、このKOマウスにおいては神経細胞の数がコントロールに比べて約2倍に増加しており、ヒトNeuronal Intestinal Dysplasia(NID)のモデルと考えられる。本研究ではNcxKOマウスにおける神経細胞数の増加の機序を明らかにした。細胞増殖について細胞核へのBrdUのとりこみを指標とした組織化学的検索を行なったが、両者では差が見られなかった。そこで、TUNEL法により腸管神経節の神経細胞死を解析したところ、コントロールマウスの腸管では、生後1〜2週頃に細胞死が生じているのに対し、KOマウスではそれが認められなかった。そこで腸管神経節における細胞死関連遺伝子(Bcl-2ファミリー、Caspaseファミリー)の発現についてRT-PCRおよび免疫組織染色により検討したところ、Bcl-2,Bcl-xl,BaxなどのBcl-2ファミリー遺伝子の発現は両者に差は認められなかった。一方Caspase1(ICE)の発現はコントロールおよびKOマウスの間で差は見られなかったが、Caspase3(CPP32)の発現はKOマウスにおいて著明に減少していた。これらの結果より、Ncxは神経堤細胞が神経細胞に分化後の細胞死の誘導に関与していることが示唆され、直接あるいは間接的にCaspase3の発現を制御していると考えられた。一方ヒトNID患者でのNCX遺伝子の変異を調べるためにヒトNCXの遺伝子構造を決定した。現在患者DNAについてSSCP法などを用いて変異を解析している。

Ncx к аト(KO)ス, giant colon disease occurs 3 to 4 weeks after birth. In Hirschsprung disease, the number of neurons in the Intestinal ganglion increased by about 2 times compared with that in the control group, and the number of neurons in the intestinal ganglion increased by 2 times compared with that in the control group. This study is aimed at clarifying the mechanism of increase in the number of neurons. Cell proliferation, cell nuclear proliferation, cell proliferation, cell proliferation, TUNEL method is used to analyze the death of neurons in the intestinal tract, and the death of neurons in the intestinal tract is detected 1 ~ 2 weeks after birth. The expression of Bcl-2, Caspase-3 and Bcl-2 mRNA in intestinal neurons was detected by RT-PCR and immunohistochemical staining. The expression of Caspase1(ICE) and Caspase3(CPP32) decreased significantly. The results showed that Ncx could inhibit the expression of Caspase3 directly and indirectly after the differentiation of neurons. The NCX gene structure of NID patients is determined by the variation of NCX gene structure. Now the patient's DNA is analyzed by SSCP.