新しいIAPファミリー蛋白TIAPによる細胞死、細胞周期の制御機構解析

IAP家族新蛋白TIAP解析细胞死亡和细胞周期的调控机制

• 批准号: 12215016
• 负责人: 幡野 雅彦
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12215016/
• 关键词: IAPファミリー; アポトーシス; 細胞周期; T細胞; トランスジェニックマウス

1.lck-TIAP遺伝子を受精卵に導入してトランスジェニック(lck-TIAP Tg)マウスを6系統作成し、その内の2系統で胸腺と脾臓由来T細胞でのTIAPの強発現を確認した。これらのlck-TIAP Tgマウスの胸腺細胞および、脾細胞におけるT細胞亜分画を各種モノクローナル抗体とFACSを用いて解析した結果、胸腺T細胞および末梢T細胞においは、正常細胞と比較して分化の差は認められなかった。またT細胞数についても各週齢においてコントロールとの差はなく、血清除去、抗CD3抗体処理、抗Fas抗体処理などによるアポトーシスにも差は認められなかった。次にlck-TIAPT Tgマウスと正常マウスの胸腺細胞をPMA+Ionomysinで刺激し、その増殖に差がみられるかどうかを検討した結果、Tgマウスにおいて3-5倍程度の3Hの取り込みの増加を認めた。FACS解析の結果、CD3-CD4-CD8lowの未熟胸腺細胞が有意に増殖していることが明かとなった。しかし抗CD3抗体による増殖や脾臓成熟T細胞の増殖反応は差が認められなかった。以上の結果から、TIAPの抗アポトーシス作用は強くはなくむしろ細胞増殖に対して分化段階特異的に作用が強く見られた。分化途中の未熟T細胞は増殖シグナルに対する準備がないため正常細胞では死に至るが、TIAP過剰状態ではS期まで入ることが出来ると考えられる。細胞分裂期におけるTIAPと他の分子との相互作用につきさらに検討が必要である。2.lck-TIAP Tgマウスは約1年の経過観察ではリンパ腫などの腫瘍は発症しない。コントロールおよびTgマウスにX線を照射し発癌能について検討した結果、約6ヶ月以内にコントロール、Tgともに同頻度で胸腺腫を発症した。しかしTgマウスにおいてより大きく進行の早い腫瘍が認められた。多くの臨床検体の解析よりSurvivinと癌化との関連が議論されている。TIAP/m-survivinは直接癌化をpromoteする蛋白ではなく癌の進行過程に作用すると考えられる。3.TIAPをプローブとしてマウスゲノミックDNAをスクリーニングし、新しいTIAPファミリーの遺伝子(TIAP2)を同定した。RT-PCR法でその発現を確認した。TIAP2は骨髄、心臓、胸腺など多くの正常マウス組織で発現が認められた。TIAP2はマウス9番染色体上に位置し、TIAPの位置(第11番染色体)とは異なっていた。またTIAPが細胞周期特異的な発現を示すのに対して、TIAP2の発現は細胞周期特異性を示さなかった。

1. LCK - TIAP heritage 伝 son を fertilized egg に import し て ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク (LCK - TIAP Tg) マ ウ ス を 6 system make し, そ の の within 2 system で thymus と origin splenic T cells で の TIAP の strong 発 を now confirmed し た. こ れ ら の LCK Tg - TIAP マ ウ ス の thymocyte お よ び, spleen cells に お け る t-cell 亜 points draw を various モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody と both FACS を with い て parsing し た results, thymus T cells お よ び peripheral t-cell に お い は, normal cells と comparison し て poor differentiation の は recognize め ら れ な か っ た. ま た t-cell count に つ い て も each week 齢 に お い て コ ン ト ロ ー ル と の poor は な く, serum removed, anti CD3 antibodies 処 principle, Fas 処 Richard な ど に よ る ア ポ ト ー シ ス に も poor は recognize め ら れ な か っ た. Time に LCK Tg - TIAPT マ ウ ス と normal マ ウ ス の thymocyte を PMA + Ionomysin で stimulation し, そ の raised poor colonization に が み ら れ る か ど う か を beg し 検 た results, Tg マ ウ ス に お い て の take 3-5 times degree の 3 h り 込 み の raised plus を recognize め た. Both FACS analytical の results, CD3, CD4 - CD8low の unripe thymocyte が intentionally に raised colonization し て い る こ と が Ming か と な っ た. The <s:1> anti-CD3 antibody による proliferating や mature T cells in the spleen <s:1> proliferating anti応 った poor が recognition められな った った った. の above results か ら, TIAP の resistance ア ポ ト ー シ ス strong role は く は な く む し ろ cells raised colonization に し seaborne て differentiation Duan Jie specific role of が strong に く see ら れ た. Differentiation on の unripe t-cell は raised colonization シ グ ナ ル に す seaborne る prepare が な い た め normal cells で は に to death る が, TIAP turning state で は S period ま る で into こ と が out る と exam え ら れ る. During the cell division phase, におけるTIAPと interacts with other <s:1> molecules と <s:1>, に, <s:1> さらに検, さらに検 seek が necessary である. 2.lck-TIAP Tg リ ウス ウス approximately one year <s:1> after 観 examination で リ リ パ パ swelling な <s:1> abscess development な な な な. コ ン ト ロ ー ル お よ び Tg マ ウ ス に を by X-ray irradiation し 発 carcinoma can に つ い て beg し 検 た results, within about six ヶ month に コ ン ト ロ ー ル, Tg と も に with frequency で thymus swollen を 発 disease し た. <s:1> が <s:1> Tg てよ ウスにお てよ てよ <s:1> large く く proceed if early ウスにお abscess が confirm められた. Multiple く <s:1> clinical 検 body <e:1> analysis よ <s:1> Survivinと carcinogenesis と が association が discussion されて る る る. TIAP/m - survivin は cancer を directly promote す る protein で は な く carcinoma の process に role す る と exam え ら れ る. 3. TIAP を プ ロ ー ブ と し て マ ウ ス ゲ ノ ミ ッ ク DNA を ス ク リ ー ニ ン グ し, new し い TIAP フ ァ ミ リ ー の heritage 伝 child (TIAP2) with fixed し を た. RT-PCR でそ <s:1> occurrence を confirmation を た. TIAP2 な the bone marrow, heart, and thymus have a large number of く normal <s:1> ウス tissues で with が identification められた. The に position of TIAP2 ウス ウス on chromosome 9 and the <s:1> position of TIAP (chromosome 11)と なって た た た た of tiap2 are different. ま た TIAP が cell cycle specific な 発 を now shown す の に し seaborne て, TIAP2 の 発 は cell cycle specificity を now shown さ な か っ た.

项目成果

Kojima, S., et al.: "Disruption of the Bcl6 gene increases testicular germ cell apoptosis in mice"Development. 128・1. 57-65 (2001)

Kojima, S., et al.：“Bcl6 基因的破坏增加了小鼠睾丸生殖细胞的凋亡”128·1 (2001)。

Okada,S. et al.: "Impairment of B lymphopoiesis in precocious aging (Klotho) mice."Int.Immunol.. 12・6. 861-871 (2000)

Okada, S. 等人：“早熟 (Klotho) 小鼠的 B 淋巴细胞生成受损。Int. 861-871 (2000)”

Otaki,M. et al.: "Cell cycle dependent regulation of TIAP/Survivin expression."Biochem.Biophys.Acta.. 1493・1. 188-194 (2000)

Otaki,M. 等：“TIAP/Survivin 表达的细胞周期依赖性调节”。Biochem.Biophys.Acta.1493·1 (2000)。

Nakao,A. et al.: "Blockade og TGF-b/Smad signaling in T cells by expression of Smad7 enhances antigen-induced airway inflammation and airway reactivity."J.Exp.Med.. 192・2. 151-158 (2000)

Nakao, A. 等人：“通过表达 Smad7 阻断 T 细胞中的 TGF-b/Smad 信号传导可增强抗原诱导的气道炎症和气道反应性。”J.Exp.Med.. 192・2。 2000)

Ogasawara,T. et al.: "A novel homologue of the TIAP/m-survivin gene."Biochem.Biophys.Res.Commun.. (In press). (2001)

小笠原，T.