ガングリオシド糖鎖のリモデリングによる細胞増殖制御機構の解析

神经节苷脂糖链重构分析细胞增殖调控机制

• 批准号: 09254248
• 负责人: 古川 鋼一
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09254248/
• 关键词: ガングリオシド; 糖転移酵素; PC12; メラノーマ; メラノサイト; 神経成長因子; TrkA; 増殖

本研究では、ラット褐色細胞腫PC12およびメラノサイト-メラノーマ細胞のシステムを用いて、(1)糖鎖リモデリング細胞の形態や増殖度などの表現型の変化、(2)その増殖シグナル伝達分子や増殖関連転写因子の変化、(3)ガングリオシドと会合し相互作用する分子の同定と意義を解明することにより、細胞増殖制御におけるガングリオシドの役割と、癌細胞における意義を明らかにせんとした。PC12にβ1,4GalNAc転移酵素、α2,シアル酸転移酵素cDNAを導入し、増殖度とNGFに対する反応性(突起伸長)を検討したところ、後者のトランスフェクタントは著しく増殖度が亢進すると共に、NGFに不応性となった。この細胞におけるシグナル分子の変異を検討した結果、恒常的なNGF受容体(TrkA)のリン酸化とMAPKの活性化を認めた。糖鎖変異の検討ではGD1bの発現上昇が最も顕著に認められた。ハービマイシンA、K252a、ワルトマニン、PD98059などのインヒビターを用いた実験より、TrkA、Raf、Ras、MEKおよびMARKを介する経路の持続的活性化が、分化ではなく増殖の方向にPC12細胞を誘導したと考えられた。現在、GD1bとTrkAとの相互反応と受容体の二量体形成に関して検討すると共に、レチノイン酸添加などによるアポトーシス誘導への感受性の変異を検討中であり、トランスフェクタントにおける抵抗性の出現など、興味ある結果が得られつつある。またヒトメラノーマの初代培養を行い良好な増殖条件を確立すると共に、現在、3種の糖転移酵素遺伝子導入を進めており、樹立したトランスフェクタントについてPC12と同様の解析を行う予定である。

In this study, we investigated the use of cell morphology in brown cell tumors PC12,(1) phenotypic changes in the morphology and proliferation of glucose-dependent cells,(2) molecular and genetic-related factors in the proliferation of cells,(3) molecular identity and significance of molecular interactions in the proliferation of cells, and (4) molecular and genetic changes in the proliferation of cells. Cell proliferation control, cancer cell management, cancer cell management When the β1,4GalNAc transferase and α2, citrate transferase cDNAs were introduced into PC12, the reactivity (protrusion elongation) between the proliferation and NGF was investigated. The latter's transcription factor has increased the proliferation, and NGF is invariant. As a result of the differential analysis of these cellular molecules, a constant NGF receptor (TrkA) and MAPK activation were identified. GD1b appears to be the most common cause of death. The activation and differentiation of PC12 cells mediated by TrkA, Raf, Ras, MEK, and MARK were investigated. Now, the interaction between GD1b and TrkA is related to the formation of two quantities of receptors. In the discussion of the sensitivity difference between acid addition and induction, the occurrence of resistance and interest are obtained. In order to establish good conditions for the initial culture of PC12, we need to introduce three kinds of sugar transfer enzyme genes into PC12 and analyze them.

项目成果

Goi,T.: "Reduced expression of deleted colorectal carcinoma(DCC)protein in established colon cancers:Analysis by a specific monoclonal antibody." Brit.J.Cancer. 77. 466-471 (1998)

Goi,T.：“已建立的结肠癌中删除的结直肠癌 (DCC) 蛋白的表达减少：通过特定的单克隆抗体进行分析。”

Fukumoto,S.: "Genetic remodeling of gangliosides resulted in the enhanced reactions to the foreign substances in skin." Glycobiology. 7. 1111-1120 (1997)

Fukumoto,S.：“神经节苷脂的基因重塑导致皮肤对异物的反应增强。”

Nagata,Y.: "Expression cloning of rat cDNA of UDP-galactose:GD2 β1,3-galactosyltransferase that determines the expression of GD1b/GM1/GA1." J.Biol.Chem.272. 24794-24799 (1997)

Nagata, Y.：“确定 GD1b/GM1/GA1 表达的 UDP-半乳糖：GD2 β1,3-半乳糖基转移酶的大鼠 cDNA 的表达克隆。J.Biol.Chem.272 (1997)。

Ikeda,H.: "Mutated MAP kinase;A tumor rejection antigen of mouse sarcoma." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 94. 6375-6379 (1997)

Ikeda,H.：“突变的 MAP 激酶；小鼠肉瘤的肿瘤排斥抗原。”

Daniotti,J.L.: "Expression of β1-4 N-acetylgalactosaminyl-transferase gene in the developing rat brain and retina:mRNA,protein immunoreactivity and enzyme activity." Neurochem.Int.31. 11-19 (1997)

Daniotti, J.L.：“β1-4 N-乙酰半乳糖胺基转移酶基因在发育中的大鼠大脑和视网膜中的表达：mRNA、蛋白质免疫反应性和酶活性。Neurochem.Int.31 (1997)。