糖鎖合成系遺伝子の発現プロフィールと多型性解析による病態解明

通过糖链合成基因的表达谱和多态性分析阐明病理学

• 批准号: 14013028
• 负责人: 古川 鋼一
• 金额: $ 3.58万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14013028/
• 关键词: DNAチップ; 糖転移酵素; DNAアレイ; GB3; 糖鎖合成酵素; 糖鎖遺伝子

神経変性疾患および癌の病態診断と治療法の開発に資することを企図して、約130種の糖鎖合成酵素遺伝子の発現プロファイルの解析のためのDNAチップの開発をめざした。70merの糖鎖合成酵素遺伝子オリゴDNAを合成して、スライドグラス上にスポットした。発現パターンが判明している細胞株を用いて、polyA RNAの蛍光標識を行い、ハブリダイゼーションを行ったところ、その結果と糖脂質発現のパターンとは合致しなかった。そこで、カンパニーの協力により、50merのオリゴDNAを合成して、3次元カラムに固定したアレイを作成した。本アレイを用いて、既知の5遺伝子、それらを高発現する細胞株由来のRNAを用いて同様の解析を行ったところ、糖鎖発現と概ね一致する遺伝子発現パターンが得られると共に、ノザンブロットの結果とも大体一致するintensityと検出感度が得られることが示唆された。現在、さらにstringencyを厳しくした条件で特異性の高いシグナルが得られるように工夫を重ねており、得られるはずの条件下で、アレイ全体のハイブリダイゼーションを行って、まず細胞株における発現プロファイルを解析したいと考えている。その後で、様々な固形腫瘍における発現プロファイルの解析へと展開する予定である。一方、糖脂質Gb3合成酵素と血液型P1合成酵素との異同が以前より問題になってきたが、Gb3合成酵素遺伝子導入細胞を用いて、両者が同一であることを明らかにした。さらに、血液型P1とP2の違いが、Gb3合成酵素遺伝子の構造変異にあるのではなく、同遺伝子の発現調節領域にP2特異的変異が2ケ所存在することを明らかにした。現在、この5'上流領域のプロモーター活性と、人種間の差異の有無を検討中である。

God 経 - disorder お よ の び cancer pathological diagnosis と therapy の open 発 に endowment す る こ と を enterprise 図 し て, about 130 kinds of の sugar lock synthetic enzyme heritage 伝 son の 発 now プ ロ フ ァ イ ル の parsing の た め の DNA チ ッ プ の open 発 を め ざ し た. 70mer of the glycollocytosynthase remains 伝 subsequon リゴDNAを to synthesize <s:1> て, スラ ドグラス ドグラス on にスポット た た. 発 now パ タ ー ン が.at し て い る cell lines を with い て, polyA RNA の 蛍 light logo を い, ハ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン を line っ た と こ ろ, そ の results と sugar lipid 発 is の パ タ ー ン と は close to し な か っ た. そ こ で, カ ン パ ニ ー の together に よ り, 50 killing の オ リ ゴ を DNA synthesis し て, 3 dimensional カ ラ ム に fixed し た ア レ イ を made し た. This ア レ イ を with い て, both know の 5 heritage 伝, そ れ ら を high 発 now す る cell lines origin の RNA を with い て with others in line analytical を の っ た と こ ろ, sugar lock 発 と now almost consistent ね す る posthumous son 伝 発 now パ タ ー ン が have ら れ る と に, ノ ザ ン ブ ロ ッ ト の results と も broadly す る intensity と が 検 out sensitivity to ら れ る こ と Youdaoplaceholder0 indicates された. Now, さ ら に stringency を 厳 し く し た conditions で high specificity の い シ グ ナ ル が have ら れ る よ う に time を heavy ね て お り, ら れ る は ず の で, under the condition of ア レ イ all の ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン を line っ て, ま ず cell lines に お け る 発 now プ ロ フ ァ イ ル を parsing し た い と exam え て い る. After そ そ, で and 々な solidified abscess における occurs プロファ プロファ <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> analysis へと development する determination である. Side, sugar, lipid Gb3 と blood type synthetic enzyme P1 synthetic enzyme と の similarities and differences before が よ り problem に な っ て き た が Gb3 synthesis and enzyme heritage 伝 import cells を with い て, struck the same で が あ る こ と を Ming ら か に し た. さ ら に, blood type P1 と P2 の violations い が Gb3 synthesis and enzyme heritage 伝 sub - different structures の に あ る の で は な く, with but 伝 の 発 に P2 is adjusting field specific variations exist different が 2 ケ す る こ と を Ming ら か に し た. Now, there is a discussion on whether there are を検 and である regarding the activity of the プロモ, タ, and <e:1> differences, and whether there are any issues.

项目成果

Inoue, M. et al.: "Refractory skin injury in the complex knock-out mice expressing only GM3 ganglioside"J. Biol. Chem.. 277. 29881-29888 (2002)

Inoue, M. 等人：“仅表达 GM3 神经节苷脂的复杂基因敲除小鼠中的难治性皮肤损伤”J.

Mitsuda, T. et al.: "Over-expression of ganglioside GM1 results in the dispersion of platelet derived growth factor receptor from glycolipid-enriched microdomains and in the suppression of cell growth signals"J.Biol.Chem.. 277. 11239-11246 (2002)

Mitsuda, T. 等人：“神经节苷脂 GM1 的过度表达导致血小板衍生的生长因子受体从富含糖脂的微结构域中分散，并抑制细胞生长信号”J.Biol.Chem.. 277. 11239-

Furukawa, K. et al.: "Expression of the Gb3/CD77 synthase gene in megakaryoblastic leukemia cells : implication in the sensitivity to verotoxins"J. Biol. Chem.. 277. 11247-11254 (2002)

Furukawa, K. 等人：“巨核细胞白血病细胞中 Gb3/CD77 合酶基因的表达：对维罗毒素敏感性的影响”J.

Okada, M. et al.: "b-series ganglioside deficiency exhibits no definite changes in the neurogenesis and the sensitivity to Fas-mediated apotosis, but impairs regeneration of the lesioned hypoglossal nerve"J. Biol. Chem.. 277. 1633-1636 (2002)

Okada, M. 等人：“b 系列神经节苷脂缺乏症在神经发生和对 Fas 介导的细胞凋亡的敏感性方面没有表现出明确的变化，但会损害受损舌下神经的再生”J.

Nakamura, Y. et al.: "Identification of a Drosophila gene encoding xylosylprotein β 4-galactosyltransferase that is essential for the synthesis of glycosaminoglycans and for morphogenesis"J.Biol.Chem.. 277. 46280-46288 (2002)

Nakamura, Y. 等人：“编码木糖基蛋白 β 4-半乳糖基转移酶的果蝇基因的鉴定，该酶对于糖胺聚糖的合成和形态发生至关重要”J.Biol.Chem.. 277. 46280-46288 (2002)