カイコ前胸腺刺激ホルモンの立体構造解析と機能相関

家蚕前胸激素的结构分析及功能关系

• 批准号: 11142205
• 负责人: 永田 宏次
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11142205/
• 关键词: カイコ; 前胸腺刺激ホルモン; NMR; 立体構造解析

昆虫の脱皮・変態において中心的な役割を担う前胸腺刺激ホルモン(PTTH、カイコガBombyx moriの場合109残基、タバコスズメガManduca sextaの場合106残基からなるポリペプチド鎖のホモダイマー)の立体構造解析を、多核多次元NMR法により進めた。非還元条件でのSDS-PAGE分析において、Bombyx PTTHに比べてシャープなバンドを形成するManduca PTTHを立体構造解析の標的分子として選択した。大腸菌BL21(DE3)を宿主とし、T7プロモータ制御系を用いて、^<13>C,^<15>N標識Manduca PTTHを生産した。封入体として得られた^<13>C,^<15>N標識Manduca PTTHを巻き戻した後、精製・濃縮し、NMR測定に用いた。各種^1H-^<13>C-^<15>N三重共鳴三次元NMR[HN(CO)CA,HNCA,CBCA(CO)NH,HNCACB,HNCO]を測定した。そのデータを基に、主鎖原子(^1H^N,^<15>N,^<13>C^α,^<13>C^β,^<13>C')の連鎖帰属を進行中である。これまでに、帰属すべき96残基(全アミノ酸残基数-Pro残基数-N末端残基数)のスピン系のうち34残基分を特定した。また同時に、帰属したアミノ酸残基スピン系の化学シフト値を用いて二次構造要素の分布を解析し、NMRデータに基づいたManduca PTTH分子の立体構造モデルの構築を進めている。

The service cutting in the center of insect desquamation is responsible for prothymus stimulation (PTTH, Bombyx mori and Manduca sexta), and the polynucleotide multiple NMR method is used to analyze the stereo analysis. For non-meta-conditional SDS-PAGE analysis, Bombyx PTTH is used to select the molecular parameters for the formation of Manduca PTTH stereo analysis. The giant fungus BL21 (DE3) hosts, T7 hosts, and the imperial system uses the Manduca PTTH, ^ & lt;13>C, ^ & lt;15>N tags. After sealing the body to get a copy of the ^ & lt;13>C, ^ & lt;15>N tag to identify the Manduca PTTH, the NMR is used to determine the usage. Each triple of ^ 1H-^ & lt;13>C- ^ & lt;15>N has a total of cubic NMR [HN (CO) CA,HNCA,CBCA (CO) NH,HNCACB,HNCO]. The connection between the primary atom (^ 1H ^ N, ^ & lt;15>N, ^ & lt;13> C ^ α, ^ & lt;13> C ^ β, ^ & lt;13>C') is in progress. There are 96 residues (total acid residues-Pro residues-N-terminal residues) and 34 residues (specific residues). At the same time and in the same time, the acid residues were analyzed by chemical chemistry, the distribution of secondary chemical factors was analyzed, and the stereochemistry of Manduca PTTH molecules was analyzed by NMR.