長期記憶に関わる転写因子CREBのリン酸化による活性制御の分子機構の解明
阐明长期记忆相关转录因子CREB磷酸化活性调节的分子机制
基本信息
- 批准号:08780571
- 负责人:
- 金额:$ 0.7万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
- 财政年份:1996
- 资助国家:日本
- 起止时间:1996 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
長期記憶に関わる転写因子CREBはSerがリン酸化されることにより、コアクティベータCBPと結合して転写を活性化する。このリン酸化による転写因子CREBの活性調節の分子機構を明らかにするために、CREB、CBP双方の結合領域についてNMRにより構造を解析した。CREB由来のリン酸化Serを含む33残基のペプチド(KID)を化学合成し、CBP由来の85残基(KIX)は組み換え大腸菌を使い^<13>C、^<15>Nで安定同位体標識した試料を調製した。KIX単独およびKID・KIX複合体の各種三核三重共鳴NMRを測定し、単独およびKID結合状態のKIXについて主鎖と側鎖の帰属を完了した。化学シフトインデックスからKIXの二次構造を解析し、KIXにはβストランドがなく3つのαヘリックスのみからなること、KIDに結合してもKIXの二次構造は変化しないことが示された。KIXの両状態の化学シフトを比較しKIXのKID認識残基を特定したところ、複数の塩基性残基が含まれていた。これらの塩基性残基の正電荷がKIDのリン酸化Serの負電荷の認識に寄与していると推測される。二次構造予測に従い分子モデルを構築したところ、このKID認識残基はKIXの1つの面に局在化しており、この分子表面でKIXがKIDに結合することが示された。現在、NMRから得られた構造情報をもとに、KIX単独およびKID・KIX複合体の精密な分子構造を明らかにするために構造計算を進めている。
Long-term memory writing factor CREB Ser no acidification and activation of CBP.このリン acidification factor CREB activity regulation molecular structure を明らかにするために, CREB, CBP both binding areas についてNMR により structure を analysis した. CREB is derived from the acidified Ser containing 33 residues of the chemical synthesis (KID), and CBP is derived from 85 residues The base (KIX) group is replaced with coliform bacteria and the stable isotope label of ^<13>C, ^<15>N is used to prepare the sample. Various triple-core triple resonance NMR measurement of KIX single independent KID・KIX complex, KIX combined state of single independent KID and main lock and side lock are finished. Chemical analysis of the secondary structure of KIXヘリックスのみからなること, KIDにcombinationしてもKIXのSecondary structureは変化しないことが Showされた. KIXの両STATEのchemicalシフトをComparisonしKIXのKIDRecognition residueをspecificしたところ、Plural basic residueがcontainingまれていた. The positive charge of the base residue and the negative charge of KID acidified Ser are recognized and speculated. Secondary structure prediction に従いmolecule モデルをconstruction したところ、このKID recognition residue はKIXの1 The つの面に地与しており, the このmolecule surface でKIXがKIDにcombination することが Show された. Now, NMR has obtained structural information and KIX single-unit KID・KIX complex has precise molecular structure and structural calculations.
项目成果
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专利数量(0)
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