カイコ前胸腺刺激ホルモンの立体構造解析と機能相関

家蚕前胸激素的结构分析及功能关系

• 批准号: 10161203
• 负责人: 永田 宏次
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10161203/
• 关键词: 前胸腺刺激ホルモン(PTTH); 脱皮; 変態; 核磁気共鳴(NMR); 立体構造

昆虫の脱皮・変態において中心的な役割を担う前胸腺刺激ホルモン(PTTH)の立体構造決定を目的として、立体構造解析の標的としての各種PTTH分子の妥当性の評価、および、^<13>C,^<15>N標識Manduca PTTHの調製と多核多次元NMRの測定と解析を行った。1. 立体構造解析の標的としての各種PTTH分子の妥当性の評価非還元条件でのSDS-PAGE分析において、Bombyx PTTHは泳動度が小さくスメアだが、Manduca PTTHは泳動度が大きくシャープなバンドを形成する(松林秀貴、私信)。このことから、Manduca PTTHはBombyx PTTHに比べて、均一性が高くコンパクトな高次構造を有することが示唆された。ゆえに標的分子としてManduca PTTHを選択した。2. ^<13>C,^<15>N標識Manduca PTTHの調製と多核多次元NMRの測定と解析^<13>C,^<15>N標識Manduca PTTHを21のM9最少培地から1.4mg得た。スピン-スピン結合した^1Hと^<15>Nの相関を検出するHSQCスペクトルを測定・解析した結果、Manduca PTTHが、β構造に富む二次構造を持つこと、および、分子内で運動性の低い領域(rigidな高次構造をとる)と高い領域(flexibleで特定の高次構造を持たない)とに分けられることが示された。この結果から、NMR法によるManduca PTTH分子の立体構造決定が成功するめどがついた。現在、^1H-^<13>C-^<15>N三重共鳴三次元NMRの測定と解析を進めている。

Insects の desquamate, state - に お い て な battle in the center of the thymus before cutting を bear う stimulus ホ ル モ ン (PTTH) の three-dimensional structure decision を purpose と し て, three-dimensional structure analytic の mark と し て の PTTH molecular の justice の review 価, お よ び, ^ < 13 > C, ^ < 15 > N logo Manduca PTTH block modulation と multi-nuclear multiple element NMR <s:1> determination と analysis を line った. 1. Three-dimensional structure analysis of <s:1> target と て て <s:1> various PTTH molecules, performance evaluation 価 non-reducing conditions で, SDS-PAGE analysis にお て て, Bombyx PTTH <s:1> mobility が small さくスメアだが, Manduca The large が of PTTH が プなバ プなバ ドを ドを forms する(Hideki Matsuyama, private message). こ の こ と か ら, Manduca PTTH は b. PTTH に than べ て, high uniformity が く コ ン パ ク ト な high times tectonic を す る こ と が in stopping さ れ た. Youdaoplaceholder0 target molecule と てManduca PTTHを select 択 た た. 2. ^<13>C,^<15>N labeled Manduca PTTH <s:1> modulated と multi-nuclear multiple-element NMR <e:1> determination と analysis ^<13>C,^<15>N labeled Manduca PTTHを21 samples M9 minimum pedidium ら ら1.4mg obtained た. ス ピ ン - ス ピ ン combining し た 1 h と ^ ^ < 15 > N の phase masato を 検 out す る HSQC ス ペ ク ト ル を determination, parsing し た results and Manduca PTTH が, beta structure に rich む secondary tectonic を hold つ こ と, お よ び, intramolecular で low motility の い field (it rigid な high secondary tectonic を と る) high と い areas (flexible で specific の を hold high order structure た な い) と に points け ら れ る こ と が shown さ れ た. The <s:1> <s:1> results of ら ら and the NMR method によるManduca PTTH molecule <s:1> stereostructure determination が success するめ <s:1> が が が た た た た た た た Now, ^1H-^<13>C-^<15>N triple resonance three-dimensional NMR <s:1> determination と analysis を enter めて る る.