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メタロプロテアーゼによる細胞膜結合型蛋白質の分泌機構の解明

阐明金属蛋白酶分泌细胞膜结合蛋白的机制

基本信息

批准号：
11144211
负责人：
石浦章一
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11144211/
关键词：
アルツハイマー病アミロイド前駆体プロテアーゼ ADAM MDC9 セクレターゼ

项目摘要

細胞膜結合型蛋白質の中には、プロセシングによって機能ドメインが細胞外に分泌されるのものがある。その代表例が、腫瘍壊死因子α、腫瘍成長因子α、アミロイド前駆体蛋白質(APP)、L-セレクチンなどである。これらは、通常のFurin型プロセシング酵素ではなく、特殊なメタロプロテアーゼによる限定分解を受けることが知られている。今年度は、APPを例にとってプロセシング酵素の1つを(βセクレターゼ活性を持つThimet oligopeptidase)を精製し、cDNAクローニングと遺伝子導入によるプロセシングの確認を行った。また、もう1つのAPPプロセシング酵素であるαセクレターゼ活性をもつディスインテグリン型メタロプロテアーゼMDC9の生理機能を明らかにした。特にMDC9が、APPαセクレターゼ活性を持つことを初めてin vivoで実証した。具体的には(1)MDC9cDNAと、メタロプロテアーゼドメインを欠くMDC9(delMP)cDNAをAPPと共にCOS細胞に導入し、プロセシング活性の変化を指標にMDC9の作用を見た。α部位でのプロセシングは、細胞外に分泌された断片を切断部位特異的抗体によって定量化した。(2)実際にMDC9がαセクレターゼとして働いているかどうかを再検討するため、MDC9の全長アンチセンスcDNAを細胞に導入し、APPのα部位での分解が抑えられることを確認した。現在、このMDC9遺伝子が家族性アルツハイマー病遺伝子の近傍に存在するため、患者での遺伝子変異があるかどうかについても検討している。(3)ディスインテグリン型メタロプロテアーゼには特異的な低分子阻害剤がないために、類似酵素の作用の区別がつきにくい。メタロプロテアーゼ阻害剤であるヒドロキサム酸アナログを用いて特異性の高い阻害剤開発を行った。

In the membrane-binding protein enzyme, the extracellular secretion of the extracellular protein was detected by the mechanism of cell membrane binding protein. Malondialdehyde represents the example, the death factor α, the growth factor alpha, the precursor protein alpha (APP), and the L-phenotypic protein alpha. In general, there are some enzymes in the Furin type, and the enzyme in the special group is limited to the decomposition of enzymes. In this year's APP, we need to know that the enzyme activity is high. (β-enzyme activity holds Thimet oligopeptidase). This year, the enzyme (β-enzyme activity), cDNA, enzyme activity, enzyme activity, enzyme The enzyme activity of the enzyme was detected by APP. The activity of the enzyme was determined by the physiological mechanism of the enzyme. The physiological mechanism was able to detect the activity of the enzyme. Special MDC9, APP α, low temperature, high activity, low temperature, high activity, low activity, high activity, low activity, low activity, high activity, low activity, low activity, high activity, low activity The specific words "MDC9cDNA", "cDNA", "APP", "cDNA", "APP", "COS", "active" and "MDC9" refer to the effect of MDC9. The antibody of the α site was quantified by the specific antibody of the cut site, such as the secretion of extracellular protein, the secretion of extracellular protein and the specific antibody of the cut site. (2) in the international MDC9