课题基金 / 基金详情

自然突然変異抑制に働く8-oxo-dGTPaseの3次元構造に基づく機能解明

自然突然変異抑制に働く8-oxo-dGTPaseの3次元構造に基づく機能解明
基于抑制自发突变的 8-oxo-dGTPase 三维结构的功能阐明
批准号：
11146211
负责人：
山縣 ゆり子
金额：
$1.28万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1999 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11146211/
关键词：
8-oxo-dGTPaseMutT蛋白質X線結晶構造解析MutT-8-oxo-dGMP複合体

项目摘要

项目成果

山縣 ゆり子的其他基金

相关文献

中文摘要
翻译
本研究の目的は、活性酸素がdGTPと反応し生じる変異原性ヌクレオチド8-oxo-dGTPを8-oxo-dGMPに分解し、ヌクレオチドプールを浄化する大腸菌とヒト由来の8-oxo-dGTPase(MutTとhMTH1)、および、それらと基質アナログ複合体のX線結晶構造解析を行ない、原子レベルで8-oxo-dGTPの認識機構、リン酸ジエステル結合切断機構を解明することである。大腸菌MutTフリーについては、白金誘導体を用いた重原子同型置換法で解析、得られた電子密度から3次元構造モデルの構築を試みていたが、全領域のモデル構築に成功しなかったので、引き続き、別の重原子誘導体の検索を行った。結晶に約30種の重原子をsoakingし、それら重原子誘導体結晶のX線回折データを主に、高エネルギー加速器研究機構の放射光(PF)ビームラインBL18Bで測定したところ、さらにカドミニウムや水銀の重原子誘導体が位相決定に寄与することがわかり、現在これらの重原子誘導体結晶のデータを加えて解析、得られた電子密度から3次元構造モデルの構築を試みている。MutT-Mn^<2+>複合体については、MutTフリーの構造が解け次第、分子置換法で解析し、Mn^<2+>(Mg^<2+>と同じと考えられる)の結合様式を決定する。基質アナログ複合体については、基質アナログのsoakingを行う予定である。hMTH1の大量発現ベクターを組み込んだ大腸菌(九州大学中別府教授から供与された)を培養、大量生産させ、高純度で精製した。hMTH1の3次元構造については、奈良先端科学技術大学院大学白川博士らとの共同研究でNMRでの解析が進行している。
英文摘要
本研究の目的は、活性酸素がdGTPと反応し生じる変異原性ヌクレオチド8-oxo-dGTPを8-oxo-dGMPに分解し、ヌクレオチドプールを浄化する大腸菌とヒト由来の8-oxo-dGTPase(MutTとhMTH1)、および、それらと基質アナログ複合体のX線結晶構造解析を行ない、原子レベルで8-oxo-dGTPの認識機構、リン酸ジエステル結合切断機構を解明することである。大腸菌MutTフリーについては、白金誘導体を用いた重原子同型置換法で解析、得られた電子密度から3次元構造モデルの構築を試みていたが、全領域のモデル構築に成功しなかったので、引き続き、別の重原子誘導体の検索を行った。結晶に約30種の重原子をsoakingし、それら重原子誘導体結晶のX線回折データを主に、高エネルギー加速器研究機構の放射光(PF)ビームラインBL18Bで測定したところ、さらにカドミニウムや水銀の重原子誘導体が位相決定に寄与することがわかり、現在これらの重原子誘導体結晶のデータを加えて解析、得られた電子密度から3次元構造モデルの構築を試みている。MutT-Mn^<2+>複合体については、MutTフリーの構造が解け次第、分子置換法で解析し、Mn^<2+>(Mg^<2+>と同じと考えられる)の結合様式を決定する。基質アナログ複合体については、基質アナログのsoakingを行う予定である。hMTH1の大量発現ベクターを組み込んだ大腸菌(九州大学中別府教授から供与された)を培養、大量生産させ、高純度で精製した。hMTH1の3次元構造については、奈良先端科学技術大学院大学白川博士らとの共同研究でNMRでの解析が進行している。
期刊论文(6)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Kazufumi Takano: "Effect of Foreign N-terminal Residues on the Conformational Stability of Human Lysozyme"Eur. J. Biochem.. 266. 675-682 (1999)
Kazufumi Takano：“外源 N 末端残基对人溶菌酶构象稳定性的影响”Eur。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Shuichiro Goda: "Amyloid Protofilament Formation of Hen Egg Lysozyme in Highly Concentrated Ethanol Solution"Protein Science. 9. 381-388 (2000)
Shuichiro Goda：“高浓度乙醇溶液中鸡蛋溶菌酶的淀粉样原丝形成”蛋白质科学。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Kazufumi Takano: "Contribution of Hydrogen Bonds to the Conformational Stability of Human Lysozyme: Calorimetry and X-ray Analysis of Six Serine -> Alanine Mutants"Biochemistry. 38. 6623-6629 (1999)
Kazufumi Takano：“氢键对人类溶菌酶构象稳定性的贡献：六种丝氨酸 -> 丙氨酸突变体的量热法和 X 射线分析”生物化学。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Kazufumi Takano: "Experimental Verification of the 'Stability Profile of Mutant Protein' (SPMP) Data Using Mutant Human Lysozymes"Protein Engineering. 12. 663-672 (1999)
Kazufumi Takano：“使用突变人类溶菌酶对‘突变蛋白稳定性特征’（SPMP）数据进行实验验证”蛋白质工程。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
膜に関わる蛋白質の構造生物学的研究
  • 批准号：
    19036023
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 资助金额：
    $3.84万
  • 财政年份：
    2007
  • 负责人：
    山縣 ゆり子
  • 依托单位：
    Kumamoto University
自然突然変異抑制に働く8-oxo-dGTPaseの加水分解機構の解明
  • 批准号：
    18031029
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 资助金额：
    $7.49万
  • 财政年份：
    2006
  • 负责人：
    山縣 ゆり子
  • 依托单位：
    Kumamoto University
がん化に関わる蛋白質の立体構造に基づく機能制御
  • 批准号：
    18011007
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 资助金额：
    $7.68万
  • 财政年份：
    2006
  • 负责人：
    山縣 ゆり子
  • 依托单位：
    Kumamoto University
がん化に関わる転写因子の立体構造に基づく機能解明と阻害剤の接計
  • 批准号：
    17012019
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 资助金额：
    $5.63万
  • 财政年份：
    2005
  • 负责人：
    山縣 ゆり子
  • 依托单位：
    Kumamoto University