权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

自然突然変異抑制に働く8-oxo-dGTPaseの3次元構造に基づく機能解明

基于抑制自发突变的 8-oxo-dGTPase 三维结构的功能阐明

基本信息

批准号：
11146211
负责人：
山縣ゆり子
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11146211/
关键词：
8-oxo-dGTPase MutT蛋白質 X線結晶構造解析 MutT-8-oxo-dGMP複合体

项目摘要

本研究の目的は、活性酸素がdGTPと反応し生じる変異原性ヌクレオチド8-oxo-dGTPを8-oxo-dGMPに分解し、ヌクレオチドプールを浄化する大腸菌とヒト由来の8-oxo-dGTPase(MutTとhMTH1)、および、それらと基質アナログ複合体のX線結晶構造解析を行ない、原子レベルで8-oxo-dGTPの認識機構、リン酸ジエステル結合切断機構を解明することである。大腸菌MutTフリーについては、白金誘導体を用いた重原子同型置換法で解析、得られた電子密度から3次元構造モデルの構築を試みていたが、全領域のモデル構築に成功しなかったので、引き続き、別の重原子誘導体の検索を行った。結晶に約30種の重原子をsoakingし、それら重原子誘導体結晶のX線回折データを主に、高エネルギー加速器研究機構の放射光(PF)ビームラインBL18Bで測定したところ、さらにカドミニウムや水銀の重原子誘導体が位相決定に寄与することがわかり、現在これらの重原子誘導体結晶のデータを加えて解析、得られた電子密度から3次元構造モデルの構築を試みている。MutT-Mn^<2+>複合体については、MutTフリーの構造が解け次第、分子置換法で解析し、Mn^<2+>(Mg^<2+>と同じと考えられる)の結合様式を決定する。基質アナログ複合体については、基質アナログのsoakingを行う予定である。hMTH1の大量発現ベクターを組み込んだ大腸菌(九州大学中別府教授から供与された)を培養、大量生産させ、高純度で精製した。hMTH1の3次元構造については、奈良先端科学技術大学院大学白川博士らとの共同研究でNMRでの解析が進行している。

In this study, the purpose of this study is to analyze the X-ray structure of the complex gene 8-oxo-dGTP, 8-oxo-dGMP, 8-oxo-dGTPase, 8-oxo-dGTP, 8-MTH, 8-MTH, 6-MTH, 8-MTH, In combination with the cutting machine, it is necessary to explain the accuracy of the equipment. The MutT and platinum samples were analyzed by the heavy atom homomorphism method, and the electronic density of the whole field was successfully analyzed by using the heavy atom homomorphism method. The results show that there are about 30 kinds of heavy-atom soaking, heavy-atom alloy, X-ray back-folding electron microscope, high-temperature accelerator research institute, high-temperature accelerator research institute, high-temperature accelerator research institute, high-temperature accelerator research institute, high-temperature accelerator research institute, high-temperature accelerator research institute, high-temperature accelerator research institute, high-temperature accelerator research institute, high-temperature accelerator research institute, high-temperature accelerator research institute, high-temperature accelerator research institute, high-temperature accelerator research institute, high-temperature accelerator research institute, high-temperature accelerator research institute, high-temperature accelerator research institute, high-temperature accelerator research institute, high-temperature accelerator research institute. At present, the analysis of the crystal structure of the heavy atom alloy and the analysis of the electron density have been carried out in three dimensions. MutT- MNN ^ & lt;2+> complex, MutT template, molecular analysis, MNN & lt;2+> (mg ^ & lt;2+>) combined with the formula to determine the resolution. The genomic DNA was cloned into the soaking, and the gene was predetermined. HMTH1 has shown that a large number of bacteria (provided by other professors in Kyushu University) are cultured, a large number of bacteria are produced, and the quality is high. Dr. Shirakawa of Nara University of Advanced Science and Technology and Dr. Shirakawa of Nara University of Advanced Science and Technology co-studied the analysis of NMR in the third dimension of NMR.