造血幹細胞から巨核球への分化に関わる蛋白質群の3次元構造と機能

造血干细胞向巨核细胞分化相关蛋白的三维结构与功能

• 批准号: 13033026
• 负责人: 山縣 ゆり子
• 金额: $ 2.37万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13033026/
• 关键词: 巨核球分化; 蛋白質の大量調製; 蛋白質の結晶化; 3次元構造; 染色体凝縮; 蛋白質-蛋白質相互作用

血液中に存在する種々の血球は骨髄の造血幹細胞から分化する。その中でも血小板の前駆細胞である巨核球への分化、成熟の分子機構は、最もわかっていない研究領域である。本年度は、特に未分化な造血系組織に特異的に産生され、シグナル伝達系によく見られるリン酸化可能な配列を多くもち、巨核球への分化、細胞分裂(染色体の凝縮)に重要な役割を果たしていると推定されるヒトDRF-1(分子量約12万)に集中して結晶化を行い、X線構造解析法で3次元構造を決定し、DRF-1の機能解明を目指した。本年度の研究状況は以下の通りである。(1)ヒトDRF-1の大腸菌からの大量調製系の確立に成功していたので、本年度も引き続き、その確立した方法で数mgの蛋白質を高純度に精製し、結晶化条件の検討を行っている。特に本年度はタンパク溶液に微量に含まれる低分子化合物の除去を徹底して行い、結晶化条件の探索を行っているが、現在のところ結晶は得られていない(山縣)。(2)全長蛋白質の結晶化をあくまで追求しつつ、同時に大腸菌内在性のプロテアーゼによる精製蛋白質の分解を調べたところ、N末から主に2万と9万の蛋白質が比較的安定に得られることがわかった。そのうち2万のドメイン蛋白質を純度よく精製できたので、これについても結晶化を行っているが、現在のところ良好な結晶は得られていない(山縣)。(3)大腸菌から精製したヒトDRF-1は、可溶化剤による可溶化、巻き戻しのステップを通っているので、天然の三次元構造をもつはずの動物細胞からのDRF-1を精製、大腸菌からのものと比較することを目的にどの細胞でDRF-1が高発現かを調べCOS7細胞中の発現が多いことが判っていたのでCOS7細胞を培養し、DRF-1の精製を試みている(山縣、土井)。

In the blood, there are する kinds of 々 <s:1> blood cells, bone marrow, <s:1> hematopoietic stem cells, and ら differentiation する. In そ の で も platelet の 駆 cells before で あ る giant nuclear ball へ の differentiation, mature institutions は の molecules, most も わ か っ て い な い research field で あ る. This year は, に undifferentiated tissue な hematopoietic system に specific に さ れ, シ グ ナ ル 伝 da system に よ く see ら れ る リ ン acidification may な match column を く も ち, giant nuclear ball へ の differentiation, cell division (chromosome condensation の) に important な "を cut fruit た し て い る と presumption さ れ る ヒ ト DRF - 1 (molecular weight about 120000) に concentrated し て crystallization を line The X-ray construction analysis method で the three-dimensional construction を determines the, and the DRF-1 <s:1> function explanation を the finger of the eye た た. The <s:1> research status of this year である the following <s:1> general である である. (1) ヒ ト DRF - 1 の coliform か ら の large modulation is の establish に successful し て い た の で, this year's も き 続 き, そ の establish し で た method for mg の protein を high-purity に refined し, crystallization conditions の 検 line for を っ て い る. Special に this year は タ ン パ に ク solution contains trace に ま れ る low molecular compound の eliminate を complete し て line の い, crystallization conditions to explore を っ て い る が, now の と こ ろ crystallization は must ら れ て い な い (mountain county). の (2) full length protein crystallization を あ く ま で pursuit し つ つ, at the same time に coliform internality の プ ロ テ ア ー ゼ に よ る refined protein decomposition を の adjustable べ た と こ ろ, at the end of the N か ら に 20000 と 90000 の protein が relative stability に ら れ る こ と が わ か っ た. そ の う ち 20000 の ド メ イ ン protein purity を よ く refined で き た の で, こ れ に つ い て も crystallization を line っ て い る が, now の と こ ろ な crystallization は have good ら れ て い な い (mountain county). (3) the coliform か ら refined し た ヒ ト は DRF - 1, solubilization tonic に よ る solubilization, 巻 き 戻 し の ス テ ッ プ を tong っ て い る の で three dimensional structure, natural の を も つ は ず の animal cell か ら の を refined DRF - 1, coliform か ら の も の と compare す る こ と を purpose に ど の cells で が DRF - 1 high 発 now か を べ COS More than 7 cells の 発 now が い こ と が convicted っ て い た の で COS7 cell を し, の refined を DRF - 1 try み て い る (mountain counties, doi).

项目成果

Kazufumi Takano et al.: "Role of Non-glycine Residues in Left-handed Helical Conformation for the Conformational Stability of Human Lysozyme"Proteins. 44. 233-243 (2001)

Kazufumi Takano 等人：“左手螺旋构象中非甘氨酸残基对人溶菌酶构象稳定性的作用”蛋白质。

Hiroshi Takatsuna: "Indentification of TIFA as an Adaptor Protein That Links TRAF6 to IRAK-1 in IL-1 Receptor Signaling"Journal of Biological Chemistry. (in press). (2003)

Hiroshi Takatsuna：“鉴定 TIFA 作为 IL-1 受体信号传导中将 TRAF6 与 IRAK-1 连接的衔接蛋白”生物化学杂志。

Yuriko Yamagata et al.: "Entropic Stabilization of the Tryptophan Synthase α-Subunit from a Hyperthermophile, Pyrococcus furiosus : X-ray Analysis and Calorimetry"Journal of Biological Chemistry. 276(16). 11062-11071 (2001)

Yuriko Yamagata 等人：“来自超嗜热菌激烈热球菌的色氨酸合酶 α-亚基的熵稳定：X 射线分析和量热法”生物化学杂志 276(16) (2001)。

Kazufumi Takano et al.: "Contribution of Polar Groups in the Interior of a Protein to the Conformational Stability"Biochemistry. 40. 4853-4858 (2001)

Kazufumi Takano 等人：“蛋白质内部极性基团对构象稳定性的贡献”生物化学。

Shuichiro Goda et al.: "Elongation in a □-Structure Promotes Amyloid-like Fibril Formation of Human Lysozyme"Journal of Biochemistry. 132. 655-661 (2002)

Shuichiro Goda 等人：“α-结构的伸长促进人类溶菌酶的淀粉样原纤维形成”《生物化学杂志》132. 655-661 (2002)。