课题基金 / 基金详情

核膜を介した双方向輸送に関わる蛋白質の多様な相互作用の構造生物学的研究

核膜を介した双方向輸送に関わる蛋白質の多様な相互作用の構造生物学的研究
参与跨核膜双向运输的蛋白质各种相互作用的结构生物学研究
批准号：
17048022
负责人：
山縣 ゆり子
金额：
$4.29万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
2005 至 2006
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17048022/
关键词：
RNA輸送構造生物学核膜輸送タンパク質タンパク質の結晶化タンパク質の大量発現

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项目成果

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熊本大学谷らによって酵母のmRNAの核外輸送ができない温度感受性株の一つの原因蛋白質として見出されたPtr7はATP/GTP結合モチーフをもつ酵母の生育に必須の新規蛋白質で、核膜を介した核と細胞質間の双方向の輸送に必須であることが示されている。本研究の目的は、この新たに見出されたPtr7のX線結晶構造解析を行い、核膜孔複合体因子の一部に見られ、輸送に関わる蛋白質と相互作用するFGリピート領域と同様の配列をもつ意味やヒトPtr7と相互作用すると考えられている幾つかの蛋白質との核膜を介したソフトな相互作用を解明することである。昨年に引き続き、可溶性でより大量に得られる発現系の検討を行っている。昨年度発現ベクターはpBluescrpt系とpET系ベクターをもとに独自に作成したものを用い、大腸菌での発現、精製を試みたが、タグが無いため、うまく精製できなかった。本年度は、タグ(MBP、Trx、GSTなど)をつけた発現系の再構築を行った。融合蛋白質の発現は、特に、GST融合蛋白質について極めて高かったが、可溶性画分への移行が見られなかった。そこで、コールドショックベクターを用いた発現系を検討したところ、発現も、可溶性画分への移行も極めて良好であり、引き続き、TFタグを除くためのプロテアーゼ処理を行い、Ptr7蛋白質とTFタグの分離を試みた。いろいろなカラムクロマトグラフィーを行ったが、両蛋白質の分子量がほとんど同じであることも原因で、現在のところ、両蛋白質の分離に成功していない。そこで、融合蛋白質の状態で活性があるなら、融合蛋白質の結晶化を行うことを計画、現在、融合蛋白質のin vivoでの活性を調べている。
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科研奖励(0)
会议论文
Irreversible inhibition of metallo-β-lactamase (IMP-1) by 3-(3-mercaptopropionylsulfanyl)propionic acid pentafluorophenyl ester
DOI： 10.1002/anie.200500835
发表时间： 2005-01-01
期刊： ANGEWANDTE CHEMIE-INTERNATIONAL EDITION
影响因子： 16.6
作者： [Kurosaki, H, Yamaguchi, Y, Goto, M]
通讯作者： Goto, M
Crystallization and preliminary X-ray analysis of human MTHI complexed with two oxidized nucleotides, 8-oxo-dGMP and 2-oxo-dATP
与两种氧化核苷酸（8-oxo-dGMP 和 2-oxo-dATP）复合的人 MTHI 的结晶和初步 X 射线分析
DOI： --
发表时间： 2006
期刊： Acta Cryst. F62
影响因子： --
作者： [Yoneyama, M., Fujita, T., 藤田尚志, 小野口和英, 米山光俊, 尾野本浩司, 米山光俊, 渡邊伸昌, T.Sato et al., H.Kurosaki et al., J.K.Kaushik et al., T.Nakamura et al.]
通讯作者： T.Nakamura et al.
タンパク質のかたちから生命のなぞを解く
从蛋白质的形状解开生命之谜
DOI： --
发表时间： 2005
期刊：
影响因子： --
作者： [Kosako, H., Yamaguchi, N., Aranami, C., Ushiyama, M., Kose, S., Imamoto, N., Taniguchi, H., Nishida, E., Hattori, S., 田之倉優編]
通讯作者： 田之倉優編
Probing the Role of Asp-120(81) of Metallo-β-lactamase (IMP-1) by Site-directed Mutagenesis, Kinetic Studies, and X-ray Crystallography*
DOI： 10.1074/jbc.m414314200
发表时间： 2005-05
期刊： Journal of Biological Chemistry
影响因子： 4.8
作者： [Y. Yamaguchi;Takahiro Kuroki;Hisami Yasuzawa;Toshihiro Higashi;Wanchun Jin;Akiko Kawanami;Y. Yamagata;Y. Arakawa;M. Goto;H. Kurosaki]
通讯作者： Y. Yamaguchi;Takahiro Kuroki;Hisami Yasuzawa;Toshihiro Higashi;Wanchun Jin;Akiko Kawanami;Y. Yamagata;Y. Arakawa;M. Goto;H. Kurosaki
共 10 条
    膜に関わる蛋白質の構造生物学的研究
    • 批准号：
      19036023
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
    • 资助金额：
      $3.84万
    • 财政年份：
      2007
    • 负责人：
      山縣 ゆり子
    • 依托单位：
      Kumamoto University
    自然突然変異抑制に働く8-oxo-dGTPaseの加水分解機構の解明
    • 批准号：
      18031029
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
    • 资助金额：
      $7.49万
    • 财政年份：
      2006
    • 负责人：
      山縣 ゆり子
    • 依托单位：
      Kumamoto University
    がん化に関わる蛋白質の立体構造に基づく機能制御
    • 批准号：
      18011007
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
    • 资助金额：
      $7.68万
    • 财政年份：
      2006
    • 负责人：
      山縣 ゆり子
    • 依托单位：
      Kumamoto University
    がん化に関わる転写因子の立体構造に基づく機能解明と阻害剤の接計
    • 批准号：
      17012019
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
    • 资助金额：
      $5.63万
    • 财政年份：
      2005
    • 负责人：
      山縣 ゆり子
    • 依托单位：
      Kumamoto University
    海外基金