核膜を介した双方向輸送に関わる蛋白質の多様な相互作用の構造生物学的研究

参与跨核膜双向运输的蛋白质各种相互作用的结构生物学研究

• 批准号: 17048022
• 负责人: 山縣 ゆり子
• 金额: $ 4.29万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17048022/
• 关键词: RNA輸送; 構造生物学; 核膜輸送タンパク質; タンパク質の結晶化; タンパク質の大量発現

熊本大学谷らによって酵母のmRNAの核外輸送ができない温度感受性株の一つの原因蛋白質として見出されたPtr7はATP/GTP結合モチーフをもつ酵母の生育に必須の新規蛋白質で、核膜を介した核と細胞質間の双方向の輸送に必須であることが示されている。本研究の目的は、この新たに見出されたPtr7のX線結晶構造解析を行い、核膜孔複合体因子の一部に見られ、輸送に関わる蛋白質と相互作用するFGリピート領域と同様の配列をもつ意味やヒトPtr7と相互作用すると考えられている幾つかの蛋白質との核膜を介したソフトな相互作用を解明することである。昨年に引き続き、可溶性でより大量に得られる発現系の検討を行っている。昨年度発現ベクターはpBluescrpt系とpET系ベクターをもとに独自に作成したものを用い、大腸菌での発現、精製を試みたが、タグが無いため、うまく精製できなかった。本年度は、タグ(MBP、Trx、GSTなど)をつけた発現系の再構築を行った。融合蛋白質の発現は、特に、GST融合蛋白質について極めて高かったが、可溶性画分への移行が見られなかった。そこで、コールドショックベクターを用いた発現系を検討したところ、発現も、可溶性画分への移行も極めて良好であり、引き続き、TFタグを除くためのプロテアーゼ処理を行い、Ptr7蛋白質とTFタグの分離を試みた。いろいろなカラムクロマトグラフィーを行ったが、両蛋白質の分子量がほとんど同じであることも原因で、現在のところ、両蛋白質の分離に成功していない。そこで、融合蛋白質の状態で活性があるなら、融合蛋白質の結晶化を行うことを計画、現在、融合蛋白質のin vivoでの活性を調べている。

In Kumamoto University, the temperature-sensitive strain of yeast mRNA was sent out of the nucleus and the temperature-sensitive strain of yeast was detected. The combination of yeast Ptr7 ATP/GTP and yeast fertility requires new regulation protein, and the two sides of the cell must be transferred to each other by nuclear membrane mediation. The purpose of this study is to analyze the X-ray crystal analysis of Ptr7 X-ray, nuclear pore complex factor and so on. The interaction between proteins and proteins means that the interaction between FG proteins and proteins is the same as that in the field of Ptr7 interaction. Last year, there was a large number of lead-ins and soluble products. Last year, the system of pBluescrpt was used independently to make sure that the product was used, the bacteria were detected, the essence was detected, the system was clean, and the information was not available. This year's annual budget (MBP, Trx, GST calendar) will be the first of its kind in the current year. Fusion protein, specific, specific, GST fusion protein, specific, specific, GST, specific, specific, specific In this paper, we use the system to determine whether the transfer of the soluble picture is very good, that is, the transfer of the soluble picture is very good, the TF is in good condition, and the Ptr7 protein is used in this paper. The molecular weight of the protein is the same as that of the cause. Now, the protein is separated successfully. The fusion protein, the fusion protein, the fusion protein,

项目成果

Irreversible inhibition of metallo-β-lactamase (IMP-1) by 3-(3-mercaptopropionylsulfanyl)propionic acid pentafluorophenyl ester

• DOI: 10.1002/anie.200500835
• 发表时间: 2005-01-01
• 期刊: ANGEWANDTE CHEMIE-INTERNATIONAL EDITION
• 影响因子: 16.6
• 作者: Kurosaki, H;Yamaguchi, Y;Goto, M
• 通讯作者: Goto, M

Crystallization and preliminary X-ray analysis of human MTHI complexed with two oxidized nucleotides, 8-oxo-dGMP and 2-oxo-dATP

与两种氧化核苷酸（8-oxo-dGMP 和 2-oxo-dATP）复合的人 MTHI 的结晶和初步 X 射线分析

• 发表时间: 2006
• 期刊: Acta Cryst. F62
• 作者: Yoneyama;M.;Fujita;T.;藤田尚志;小野口和英;米山光俊;尾野本浩司;米山光俊;渡邊伸昌;T.Sato et al.;H.Kurosaki et al.;J.K.Kaushik et al.;T.Nakamura et al.
• 通讯作者: T.Nakamura et al.

タンパク質のかたちから生命のなぞを解く

从蛋白质的形状解开生命之谜

• 发表时间: 2005
• 作者: Kosako;H.;Yamaguchi;N.;Aranami;C.;Ushiyama;M.;Kose;S.;Imamoto;N.;Taniguchi;H.;Nishida;E.;Hattori;S.;田之倉優編
• 通讯作者: 田之倉優編

Probing the Role of Asp-120(81) of Metallo-β-lactamase (IMP-1) by Site-directed Mutagenesis, Kinetic Studies, and X-ray Crystallography*

• DOI: 10.1074/jbc.m414314200
• 发表时间: 2005-05
• 期刊: Journal of Biological Chemistry
• 影响因子: 4.8
• 作者: Y. Yamaguchi;Takahiro Kuroki;Hisami Yasuzawa;Toshihiro Higashi;Wanchun Jin;Akiko Kawanami;Y. Yamagata;Y. Arakawa;M. Goto;H. Kurosaki

Probing inhibition, and crystallographic characterization of metallo-beta-lactamase (IMP-1) with fluorescent agents containing dansyl and thiol groups

使用含有丹酰基和硫醇基团的荧光剂探测金属-β-内酰胺酶 (IMP-1) 的抑制和晶体学表征

• 发表时间: 2006
• 期刊: Chem. Med. Chem. 1
• 作者: Yoneyama;M.;Fujita;T.;藤田尚志;小野口和英;米山光俊;尾野本浩司;米山光俊;渡邊伸昌;T.Sato et al.;H.Kurosaki et al.
• 通讯作者: H.Kurosaki et al.