転写因子Gli2による神経管腹側パターン形成機構の解析

转录因子Gli2形成腹侧神经管模式的机制分析

• 批准号: 11152221
• 负责人: 佐々木 洋
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11152221/
• 关键词: 神経管; Sonic hedgehog; Gli; Meis; 遺伝子発現制御

私はこれまでに、Sonic hedgehog(Shh)による神経管腹側パターンの形成機構を明らかにするため、Shhの神経管における標的遺伝子の1つであるFoxa2(HNF3b)の発現制御機構を解析し、Shhの標的遺伝子の発現誘導にはGliファミリーの転写因子が重要な働きをしていることを見いだしてきた。そこで今年度は、標的遺伝子の発現制御がGli単独で効率よく起こっているのかどうかという点について検討した。Foxa2のエンハンサーからGli結合配列を含む様々な長さの断片を抜き出してエンハンサーの代わりに用いてトランスジェニックマウス胚を作成した。その結果、Gliはin vivoにおいてもShhの標的遺伝子の活性化に中心的な働きをしているが、in vivoでは、Gli結合配列単独では遺伝子発現の効率はよくなく、Gli結合配列を含むDNA断片(region-5)はin vivo,in vitroにおいて効率よくGli/Shhに反応することがわかった。そこで、このDNA断片にはGliと協調的に働く転写因子が結合すると考えられたので、regio-5に結合する転写因子を酵母one-hybrid法によりスクリーニングした。その結果、Meis1,Meis2,Prep1(pKnox1)というMeisファミリーに属する1群のホメオドメイン蛋白質を得た。実際、培養細胞の系において、単離されてきたMeis1,Meis2,Prep1の部分cDNAをもちいて、それらをVP16の転写活性化ドメインとの融合蛋白の形で発現すると、Gli2によるregion-5レポーターの活性化が増強された。したがって、Meis/Prepファミリーの転写因子はエンハンサーに結合してGliの作用を増強することにより標的遺伝子の活性化を行っていると考えられた。今後は、Meis/Prepの全長のcDNAを用いて、培養細胞の系でその作用を解析すると共に、マウス胚における発現をin situハイブリダイゼーションで解析する予定である。

In addition, the development mechanism of the Sonic hedgehog (Shh) in the ventral part of the brain tube is analyzed. The development mechanism of Foxa2 (HNF3b) in the Sonic hedgehog (Shh) in the ventral part of the brain tube is analyzed. The development mechanism of the Sonic hedgehog (Shh) in the ventral part of the brain tube is analyzed. This year, the target gene is developed and controlled by Gli alone. Foxa 2 's The results showed that the Gli binding sequence in vivo contained DNA fragment (region-5) in vitro and the Gli/Shh binding sequence in vivo contained DNA fragment (region-5) in vitro. The DNA fragments are coordinated by the yeast one-hybrid method, and the DNA fragments are coordinated by the yeast one-hybrid method. Meis 1, Meis 2, Prep 1 (pKnox 1), Meis 2, Prep 1 (pKnox 1), Meis 3, Meis 4, Meis 5, Meis 6, Meis 7, Meis 8, Meis 9, Meis 9, Meis In fact, some cDNAs of Meis1, Meis2, Prep1 were cut off in cultured cell lines, and some cDNAs of VP16 were activated. The activation of region-5 in Gli2 was enhanced. In addition, the activity of target genes can be enhanced by increasing the activity of target genes. In the future, the full-length cDNA of Meis/Prep will be used to analyze the role of cultured cell lines, and the development of embryos will be determined.

项目成果

Ding Q.: "Mouse Suppressor of fused is a negative regulator of Sonic hedgehog signaling and alters the subcellular distribution of Gli1"Curr. Biol.. 9. 1119-1122 (1999)

Ding Q.：“融合的小鼠抑制因子是 Sonic Hedgehog 信号传导的负调节因子，并改变 Gli1 的亚细胞分布”Curr.

Sasaki H.: "Regulation of Gli2 and Gli3 activities by an amino-terminal repression domain: implication of Gli2 and Gli3 as primary mediators of Shh signaling"Development. 126. 3915-3924 (1999)

Sasaki H.：“氨基末端抑制域对 Gli2 和 Gli3 活性的调节：Gli2 和 Gli3 作为 Shh 信号传导的主要介质的含义”开发。