転写因子の機能に注目した脊椎動物のオーガナイザー・脊索形成機構の解析

以转录因子功能为重点的脊椎动物组织者/脊索形成机制分析

• 批准号: 11154218
• 负责人: 佐々木 洋
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11154218/
• 关键词: オーガナイザー; 脊索; 遺伝子発現制御; 原腸陥入; Foxa2(HNF3β); エンハンサー

脊椎動物の基本的な体軸パターン形成においては、オーガナイザーと脊索が重要な働きをしている。そこで、本研究では、それらの構造の形成に必須の転写因子であるFoxa2(HNF3β)のエンハンサー活性に関与する転写因子を同定し、その胚発生における機能を解析することにより、オーガナイザー・脊索の形成機構を明らかにすることを目的とする。まず、マウスFoxa2エンハンサーの中から、活性に重要な塩基配列を同定するために、種間でのエンハンサー配列の比較を行った。まず、ニワトリと魚(ドワーフグーラミー)のFoxa2をクローニングし、トランスジェニックマウスを作成してエンハンサーを同定した。種間でよく保存されている配列を3つを見いだしたが、その中でも特にConserved Sequence3(CS3)と名付けた配列がエンハンサー活性に必須であることが分かった。そこで、CS3に結合する因子を同定するため、マウス7日胚cDNAライブラリーを酵母one-hybrid法によりスクリーニングしたところ、DNA結合特性上CS3結合因子の候補となる、あるファミリーの転写因子を得た。それらの転写因子は7.5日胚において、Foxa2の発現領域であるオーガナイザー・脊索だけではなく、それを含むような背側領域で背腹の勾配をもって発現していた。この様な発現は、この転写因子がCS3結合因子であることを支持するものであるとともに、この転写因子がオーガナイザー・脊索に限らず、広く胚の背側組織の形成に関与していることを示唆する。この様な発現を示す転写因子はこれまでには知られておらず、未知の背側化機構が存在することが考えられた。今後、CS3結合因子の原腸陥入時の機能を明らかにすることにより、脊椎動物の背腹パターン形成に関与する新たな分子機構を明らかにできると期待される。

Vertebrate の basic な body axis パ タ ー ン form に お い て は, オ ー ガ ナ イ ザ ー と notochord が important な 働 き を し て い る. そ こ で, this study で は, そ れ ら の の structure formation に must の planning write factor で あ る Foxa2 (HNF3 beta) の エ ン ハ ン サ ー active に masato and す る planning write factor を with し, そ の embryo 発 raw に お け る function analytical す を る こ と に よ り, オ ー ガ ナ イ ザ ー, notochord の form institutions を Ming ら か に す る こ と を purpose と す る. ま ず, マ ウ ス Foxa2 エ ン ハ ン サ ー の in か ら, active に important な salt base with column を with fixed す る た め に, interspecific で の エ ン ハ ン サ ー match column line の is を っ た. ま ず, ニ ワ ト リ と fish (ド ワ ー フ グ ー ラ ミ ー) の Foxa2 を ク ロ ー ニ ン グ し, ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス を made し て エ ン ハ ン サ ー を with fixed し た. Interspecific で よ く save さ れ て い る match column を 3 つ を see い だ し た が, そ の in で も, に Conserved Sequence3 (CS3) と pay け た match column が エ ン ハ ン サ ー active に must で あ る こ と が points か っ た. そ こ で, CS3 に combining す る factor を with fixed す る た め, マ ウ ス 7 embryo cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を yeast one hybrid method に よ り ス ク リ ー ニ ン グ し た と こ ろ, DNA binding properties in CS3 with factor の alternate と な る, あ る フ ァ ミ リ ー の planning write factor を た. そ れ ら の planning write factor は 7.5 day embryo に お い て, Foxa2 の 発 fields で あ る オ ー ガ ナ イ ザ ー, notochord だ け で は な く, そ れ を containing む よ う な dorsal area で の back an abdomen tick with を も っ て 発 now し て い た. こ の others な 発 は, こ の planning write factor が CS3 combination factor で あ る こ と を support す る も の で あ る と と も に, こ の planning write factor が オ ー ガ ナ イ ザ ー, notochord に limit ら ず, hiroo く embryo の dorsal の forms に masato and し て い る こ と を in stopping す る. こ の others な 発 を shown す now planning to write factor は こ れ ま で に は know ら れ て お ら ず, unknown の dorsal body が exist す る こ と が exam え ら れ た. In the future, as well as the combination of CS3 factor の archenteron 陥 trendy の function を Ming ら か に す る こ と に よ り, vertebrate の back abdomen パ タ ー ン form に masato and す る new た な molecular institutions を Ming ら か に で き る と expect さ れ る.

项目成果

Ding Q.: "Mouse Suppressor of fused is a negative regulator of Sonic hedgehog signaling and alters the subcellular distribution of Gli1"Curr. Biol.. 9. 1119-1122 (1999)

Ding Q.：“融合的小鼠抑制因子是 Sonic Hedgehog 信号传导的负调节因子，并改变 Gli1 的亚细胞分布”Curr.

Sasaki H.: "Regulation of Gli2 and Gli3 activities by an amino-terminal repression domain: implication of Gli2 and Gli3 as primary mediators of Shh signaling"Development. 126. 3915-3924 (1999)

Sasaki H.：“氨基末端抑制域对 Gli2 和 Gli3 活性的调节：Gli2 和 Gli3 作为 Shh 信号传导的主要介质的含义”开发。