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転写因子を標的に脂質代謝を改善する食品成分探索法の開発

开发一种通过靶向转录因子改善脂质代谢的食品成分发现方法

基本信息

批准号：
11876033
负责人：
佐藤隆一郎
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11876033/
关键词：
コレステロ-ル SREBP 転写因子

项目摘要

コレステロ-ル代謝の中心的役割を担う転写因子SREBPの活性化に焦点を絞り、培養細胞を用い高感度アッセイ系を構築し、これまで見落とされがちであった微量成分、弱活性化合物までをピックアップすることを目的に本研究を行った。本転写因子は他に例を見ないプロセシング機構により活性化される特徴を持つことから、このプロセシング機構を制御する食品微量成分の存在を蛍光顕微鏡下で視覚化できるシステムの構築を行った。本研究では、プロセシングを受けるSREBPのアミノ酸399以降は野生型のままで残し、そのN末端側をGFP(Green Fluorescein Protein)+核移行シグナルで置換した。レトロウイルスを用いた系で、融合タンパク質をふくむウイルスを細胞に感染させ、その後、蛍光顕微鏡下で光る細胞群を回収し、これを単一クロ-ンにまでした。その結果、野生型のSREBP同様に小胞体膜、核膜が光る細胞株の樹立に成功した。融合タンパク質はコレステロ-ルを豊富に含む牛血清を含む培地で培養する限り、プロセシングが起こらず膜上に留まっていた。そこで、コレステロ-ルを除いた血清にさらに内因性のコレステロ-ル合成を抑えるべく合成阻害剤を加えた培地で細胞を2日間培養したところ、細胞内のコレステロ-ル量は枯渇し、プロセシングが亢進してGFPを含むN末端側が切断され、核へと移行した結果、蛍光顕微鏡下でほとんどすべての細胞で核内のみが光る像が認められた。この結果は、本融合タンパク質が野生型と同じ細胞内部位に局在し、さらにコレステロ-ルにより調節されるプロセシング機構により切断を受けることを示している。今後は、本アッセイシステムを用いて、培地へ微量食品素材、食品タンパク質の水解物等を添加し、核内が光る活性物質を探索することが可能になると思われる。

In the center of the center, the service cuttings bear the responsibility of writing the factor SREBP, which activates the focus, and the culture of the cells uses the high sensitivity, the high sensitivity, the low concentration, the trace composition, the weakly active compound, the weak compound, the active compound. In this paper, we write that there is an example of the system in which the active system is used to make and control the trace components of food. The purpose of this study is to reduce the wild type, N-terminal, GFP (Green Fluorescein Protein) and nuclear migration (GFP) in this study. After the infection of the cells, the colony of the cells was detected in the light microscope, and the cells were infected in the system. The results showed that the cell lines of wild-type SREBP homoplasmic membrane and nuclear membrane were successfully established. The fusion product contains bovine serum, which contains the limit of the concentration of bovine serum, and the concentration of blood on the membrane. The levels of serum antigens, endogenesis, antigens, synthetic inhibitors, synthetic inhibitors, cytopathic acid, intracellular thiocyanate, N-terminal terminal oligonucleotides, N-terminal terminal oligonucleotides, nucleic acid transfer, and so on, were detected in the cells of cultured cells in the same cell in 2 days. Under the light micrometer, there is a light image in the nucleus of the cell. The results show that the wild type of the fusion virus is located in the same cell as the wild type, and the intracellular location of the wild type is the same as that of the wild type. the results show that the wild type is in the same cell as the wild type. In the future, we will use trace amounts of food materials, food materials, hydrolysates, etc., and explore photoactive substances in the nucleus.